hTERT反义核酸对急淋白血病细胞化疗药物敏感性的影响

【摘要】： 目的：本实验研究hTERT基因反义硫代寡核苷酸对Jurkat、CEM、Raji细胞及原代急性淋巴细胞白血病细胞端粒酶活性的影响；端粒酶活性受到抑制后，对化疗药物诱导凋亡的影响。 方法：采用多聚酶链式反应-酶联免疫测定法(PCR-ELISA)检测白血病细胞端粒酶活性；以逆转录-多聚酶链式反应(RT-PCR)检测hTERT基因mRNA的表达水平；以间接免疫荧光标记法和流式细胞仪检测hTERT蛋白表达的变化；以台盼蓝拒染法计数细胞数；姬姆萨(Giemsa)染色、Hoechst 33258和PI双染色法观察凋亡细胞的形态变化；琼脂糖凝胶电泳显示凋亡细胞的DNA电泳特征；通过流式细胞仪对细胞凋亡程度进行定量分析。 结果：Jurkat、CEM、Raji细胞表达高水平的端粒酶活性和hTERT蛋白，经hTERT基因反义核酸作用后，端粒酶活性、hTERT蛋白表达阳性率下降；CEM、Raji细胞伴随hTERTmRNA表达水平下降，而Jurkat、细胞hTERT mRNA表达水平无变化。hTERT基因正义核酸无上述作用。hTERT反义核酸作用于Raji、Jurkat、CEM细胞24小时后，加入柔红霉素、长春新碱、足叶乙甙，对细胞生长的抑制分别与单用柔红霉素、长春新碱、足叶乙甙相比，统计学上无显著性差异(P＞0.05)；但是当24小时后加入顺铂，与单用顺铂组相比，对细胞抑制明显增强(P＜0.05)，以48小时显著，而hTERT基因正义核酸无上述作用。姬姆萨(Giemsa)染色、 学位论义：hTERT反义核酸增加急淋山W病驯胞对化疗药物敏感件的研大 摘艺 Hoechst 33258和 PI 双染色法观察凋亡细胞的形态变化中，单川顺铂纠、hTEAf 正义核酸与顺铂联合组、＊＊口RT反义核酸与顺铂联合应用组均见到典个的凋广：纠D 胞：顺铂作用于Ran、Jurkat、CEM细胞，48d＼时见到少量凋亡细胞；hTERT反 义核酸与顺铂联合应用，48小时观察凋亡细胞明显增加；hTERT汇义核酸与顺铂 联合应用，48小时观察凋亡细胞的数量，与单用顺铂组无明显变化。hTERT反义 核酸作用于hp、加r昨t、nM细胞，M小时再加入顺铂讣m。I几，至化小时 细胞洲A琼脂糖凝胶电泳可见相隔旧0－”0加的梯状MA条带。细胞对照组、单 用顺铂组。hTERT 汇义核酸与顺铂联合应用组在48 小时，均未见到明显的梯状 DNA条带。经流式细胞仪检测，顺铂（2．5 u。of几）组作用于 Ran、Jurkat、CEM 细胞凋亡率明显低于jlgn铂（2．sumol／L）＋hTERT反义核酸组（P（．05）：）l匝铂（2．5 u mol／L）组与顺铂门．5 u mol／L）＋hTERT于义核酸组细胞凋亡率无差异（l’＞0．05）。 原代急淋细胞，检测了顺铂＋hTERT反义核酸对细胞存活率的影【旧、hTERT反义核 酸对hTERT蛋白表达影响、顺铂＋hTERT反义核酸对细胞凋亡的影响，结果与细 胞株相似。 结论：hTERT基因反义硫代寡核昔酸能抑制Jurkat、CEM、Ran细胞及原代急 性淋巴细胞白血病细胞端粒酶活性；端粒酶活性受到抑制后；增强了顺铂诱导急 性淋巴细胞臼血病细胞凋亡的作用，增加了白血病细胞对顺铂的敏感性。