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眼镜蛇毒灌胃后的兔血清对肝癌的抑瘤及促凋亡作用

孙鹏  
【摘要】: 目的:研究眼镜蛇毒灌胃后的兔血清(the serum of rabbit taking orally cobra venom,SRCV)对肝癌的体内外抑瘤作用和诱导凋亡作用,并评价其安全性。 实验方法:根据血清药理学方法,制备SRCV,以人肝癌HepG-2细胞及正常人胚肺成纤维细胞为靶细胞,以小鼠肝癌移植瘤为动物模型,通过台盼蓝拒染实验、在体抑瘤实验、流式细胞仪分析、电镜观察、TUNEL测试等实验方法,观察该制剂对肝癌的体内外抑瘤及在体促凋亡作用。通过急性毒性实验和半数有效量测定评价其安全性。 实验结果:1)高、低剂量SRCV各组的细胞毒作用均显著强于同浓度正常血清(P<0.01),其中5mg/ml剂量组的增殖抑制率均高于5μg/ml阿霉素(P<0.01);而高剂量SRCV的抑制率略高于同浓度低剂量SRCV,但无统计学显著性。同时,高剂量SRCV(5mg/ml)有显著的抗肿瘤细胞增殖作用,其作用与15μg/ml阿霉素相近。2)SRCV及正常兔血清各剂量组对人胚肺成纤维细胞有不同程度促进细胞增殖的作用,而前者促进细胞增殖的作用更强,其中1、2、5mg/ml剂量组与同浓度正常兔血清比较具统计学差异(P<0.05)。3)急性毒性实验结果,SRCV的急性毒性最小,经酸热处理后蛇毒的毒性比眼镜蛇毒原毒也有所下降,其LD_(50)均有非常显著性差异(P<0.01)。以三者LD_1的1/3量给药进行的抑瘤实验,均有显著抑瘤作用(P<0.01),其中SRCV的抑瘤率最高,经酸热处理后蛇毒的抑瘤效果与原毒相似。SRCV的半数有效量测定结果及其相对毒性参数,说明它的相对毒性较低。4)流式细胞仪分析及TUNEL测试表明SRCV使小鼠肝癌移植瘤的凋亡率显著升高,而电镜下观察可见典型凋亡细胞,光镜下观察TUNEL处理的组织切片也可见凋亡细胞。根据上述实验结果。 结论:1)SRCV对肿瘤细胞具高度选择性抑制作用,且其细胞毒作用与抑制肿瘤细胞的增殖有关;而对正常增殖细胞,不但不抑制,还能促进细胞增殖。2) SRCV较原毒的毒性降低,但仍保留了抗癌活性。3)SRCV对小鼠肝癌移植瘤 具在体促凋亡作用,与前期的体外促凋亡研究结果一致,提示SRCV的抑瘤作用 与其诱导细胞凋亡有关。4)该种血清制剂仍然不够理想,有必要在今后研究中 通过对有效组分的分离纯化,进一步提高其效价,降低其毒性。


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