真菌（E-20）中黄曲霉毒素解毒酶分离与纯化的研究

【摘要】： 目的：建立实验室规模型制备黄曲霉毒素解毒酶的分离与纯化工艺。本论文研究了两个纯化方案，方案一采用硫酸铵沉淀，分子筛(SephadexG-25)，离子交换层析，分子筛(Sephacryl S-200)四个步骤分离纯化黄曲霉毒素解毒酶；方案二采用硫酸铵沉淀，疏水层析两个步骤分离纯化黄曲霉毒素解毒酶；SDS-PAGE、PAGE鉴定蛋白纯度；模型底物法检测活性。结果：方案一得到了含三条电泳条带的酶液，酶回收率达2.7％；方案二得到了含三条电泳条带的酶液，酶回收率达10％。综合比较方案二比方案一简单、效率高，可用于实验制备黄曲霉毒素解毒酶。 运用紫外法和ELISA法进行了酶液对AFB_1催化活性的确证。紫外法检测结果显示酶液对AFB_1的有催化活性；ELISA结果显示，酶液不仅对AFB1有催化活性，而且催化效力高，与对照组相比较可使黄曲霉毒素B_1含量降低80.7％。