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真菌(E-20)中黄曲霉毒素解毒酶分离与纯化的研究

宋艳萍  
【摘要】: 目的:建立实验室规模型制备黄曲霉毒素解毒酶的分离与纯化工艺。本论文研究了两个纯化方案,方案一采用硫酸铵沉淀,分子筛(SephadexG-25),离子交换层析,分子筛(Sephacryl S-200)四个步骤分离纯化黄曲霉毒素解毒酶;方案二采用硫酸铵沉淀,疏水层析两个步骤分离纯化黄曲霉毒素解毒酶;SDS-PAGE、PAGE鉴定蛋白纯度;模型底物法检测活性。结果:方案一得到了含三条电泳条带的酶液,酶回收率达2.7%;方案二得到了含三条电泳条带的酶液,酶回收率达10%。综合比较方案二比方案一简单、效率高,可用于实验制备黄曲霉毒素解毒酶。 运用紫外法和ELISA法进行了酶液对AFB_1催化活性的确证。紫外法检测结果显示酶液对AFB_1的有催化活性;ELISA结果显示,酶液不仅对AFB1有催化活性,而且催化效力高,与对照组相比较可使黄曲霉毒素B_1含量降低80.7%。


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