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VEGF mRNA反义核酸对白血病细胞药物敏感性的影响

费嘉  
【摘要】: 目的:研究VEGF反义核酸对HL60、K562细胞以及原代白血病细胞存活、生长和药物敏感性的影响;筛选出血管内皮生长因子(VEGF)的高效反义核酸;揭示自分泌VEGF在白血病中的作用 方法:用RNAstructure(version 3.7)软件,选择总自由能(overall ΔG_(37))相对低的反义核酸,共计7条,长度18-20核苷酸,全硫代修饰;反义核酸筛选是在含10%胎牛血清的RPMI1640培养液中,按25μmol/L终浓度加药,作用于HL60、K562细胞,反义核酸作用机理以及对白血病细胞药物敏感性研究是在无血清或低浓度血清状态下进行,采用lipofectin(GIBCO,1mg/ml)试剂转染反义核酸,脂质体与反义核酸的质量比例(μg/μg)为2:1,反义核酸用无血清DMEM溶解,,设置空白对照和随机对照,转染8h,换含10%胎牛血清的DMEM培养基培养64h,,采用胎盼蓝拒染法观察存活细胞数,用MTT法分别求出VEGF反义核酸和化疗药物的半数抑制浓度(IC_(50)),用ELISA法检测培养液中VEGF蛋白水平,用RT-PCR分析反义核酸对白血病细胞VEGF mRNA表达的影响,用Giemsa染色和流式细胞仪检测白血病细胞凋亡状况。 结果:筛选出6条反义核酸对HL60、K562细胞生长、VEGF蛋白和VEGF mRNA表达有明显抑制作用。与空白对照组(AO)相比,A7组细胞生长抑制率达41.74%、培养液中VEGF蛋白表达抑制率达47.81%,与随机对照组(SCR)相比,最优序列AS7组细胞生长抑制率达31.9%、培养液中VEGF蛋白表达抑制率达51.4%,反义核酸活性与Overall ΔG_(37)密切相关(HL60:r=-0.842,P<0.01 K562:r=-0.8346,p<0.01)。VEGF反义核酸A7可提高HL60、K562细胞对As_2O_3、H、DNR的敏感性,降低化疗药物IC_(50)值,抑制VEGF蛋白表达,促进化疗 学位论文:VEGF m RNA反义核酸对白血病细胞药物敏感性的影响 前言 药物诱导的HL60、K562细胞凋亡,VEGF反义核酸A7能有效抑制原代白血病 细胞存活,与化疗药物联用,可提高化疗药物的敏感性,促进化疗药物诱导的原 代白血病细胞凋亡。 结论门)VEGF反义核酸可有效抑制HL60、K562细胞生长,下调VEGF 蛋白和VEGF mRNA的表达,VEGF反义核酸对HL60、K562细胞生长的抑制 作用呈剂量依赖性。(2)VEGF反义核酸抑制HL60、K562细胞生长的机理是抑 制细胞增殖,而不是促进细胞凋亡。o)VEGF反义核酸可提高HL60. K562细 胞对ASZO3、H、DNR的敏感性,促进化疗药物诱导的HL60、K562细胞凋亡, (4)VEGF反义核酸能有效抑制原代白血病细胞存活,提高原代白血病络胞对 化疗药物的敏感性,促进化疗药物诱导的原代白血病细胞凋亡。(5)计算机辅助 设计有助于获得更好反义核酸。历)内源性VEGF具有促进白血病细胞增殖, 降低白血病细胞对化疗药物的敏感性。


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