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甘氨酸受体在心肌细胞缺氧复氧损伤中的作用机制研究

赵雪  
【摘要】:目的 本实验是在先前发现甘氨酸(Glycine)有心脏保护作用及在心肌细胞上发现有甘氨酸受体的基础上,进一步从自由基代谢、细胞内钙超载及细胞凋亡等方面探讨甘氨酸受体在心脏保护中的作用,并用甘氨酸受体阻断法和消除细胞外氯离子法证明甘氨酸受体的性质。 方法 1、利用原代培养的SD大鼠乳鼠心肌细胞建立心肌缺氧/复氧(anoxia/reoxygenation,A/R)模型,实验分为9组:(1)对照组;(2)甘氨酸组;(3)士的宁组;(4)消除细胞外氯离子+甘氨酸组;(5)A/R组;(6)(甘氨酸+A/R)组;(7)(士的宁+A/R)组;(8)(甘氨酸+士的宁+A/R)组;(9)(消除细胞外氯离子+甘氨酸+A/R)组。测定各组培养心肌细胞内超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)的含量。 2、利用原代培养的SD大鼠乳鼠心肌细胞建立心肌缺氧/复氧(anoxia/reoxygenation,A/R)模型,实验分组同上。测定心肌细胞存活率,各组用Fluo—3/AM染色测钙和Annexin V-FITC/PI双染色测细胞凋亡率,流式细胞仪检测。 结果 (1)A/R组SOD、NO含量低于对照组(P<0.05),而MDA含量高于对照组。A/R组用甘氨酸处理后SOD、NO含量升高,MDA含量降低,与A/R组比较差异有统计学意义。而A/R组用甘氨酸+士的宁处理后,甘氨酸的上述保护作用被士的宁阻断,与A/R组比较差异无统计学意义。消除细胞外氯离子+甘氨酸+A/R时,甘氨酸的保护作用也被阻断,与A/R组比较差异无统计学意义。 (2)A/R组心肌细胞内游离钙的浓度和细胞凋亡率高于对照组(P<0.05)。A/R组用甘氨酸处理后心肌细胞内游离钙的浓度和细胞凋亡率降低,与A/R组


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