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小鼠胎肝间充质干细胞治疗缺血性脑损伤的实验研究

孙艳  
【摘要】:目的: 探讨体外神经生长因子能否诱导小鼠胎肝间充质干细胞(fetal livermesenchymal stem cells,flMSCs)向神经细胞分化;探讨小鼠flMSCs移植对缺血性脑损伤是否具有修复治疗作用;探讨在缺血性脑损伤的条件下,小鼠flMSCs能否向神经细胞分化;探讨小鼠flMSCs在缺血脑组织中迁移的机制。 材料和方法: 1.建立近交系小鼠脑缺血再灌注模型 采用改良线栓法(从颈总动脉插入线栓,可逆的阻断右侧大脑中动脉),以BALB/c和C57BL/6J两种近交系小鼠为对象,制作局灶性脑缺血再灌注模型。术后24h通过神经功能评分、脑组织TCC染色、HE染色和尼氏染色筛选出可靠的近交系小鼠模型;免疫组织化学染色观察缺血对脑组织神经细胞的损伤以及脑组织自身的再生反应。 2.体外神经生长因子诱导小鼠flMSCs向神经外胚层分化 贴壁法分离孕13.5d BALB/c胎鼠肝脏的间充质干细胞。生长曲线检测细胞增殖能力;流式细胞术测定细胞周期和表型;体外诱导细胞向脂肪、骨组织分化以鉴定功能。第6代flMSCs用以下方案进行诱导:b-FGF(10ng/ml)4d;b-FGF(10ng/ml)和FGF-8(10ng/ml)4d;b-FGF(10ng/ml),BDNF(10ng/ml)和2%B27 4d。观察诱导细胞的形态学变化。于诱导0d,4d,12d收获细胞,半定量RT-PCR检测神经特异性基因表达;免疫细胞化学染色检测神经特异性蛋白的表达。 3.小鼠flMSCs移植治疗缺血性脑损伤


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