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重组Osterix腺病毒的构建及其对成骨细胞周期影响的初探

李帆  
【摘要】:目的:探索腺病毒表达系统构建的条件,并以此为基础初步研究Osterix对C2C12细胞周期的影响。 方法:采用RT-PCR方法克隆Osterix基因片段,重组到腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV中,经Pme Ⅰ酶切线性化之后与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1用电穿孔法共转化进入大肠杆菌BJ5138,进行同源重组。经Pac Ⅰ酶切鉴定后,用脂质体法转染进入293A细胞,包装成重组腺病毒pAd-Osx。扩增、收集病毒颗粒,检测病毒滴度。感染C2C12细胞,用RT-PCR和Western Blotting检测目的基因的转录和表达。用流式细胞仪分析Osx基因对C2C12细胞周期的影响。 结果:成功构建Osterix重组腺病毒载体。收获病毒后,经测定病毒颗粒的滴度大约为2.25×10~8v·p/ml。将上述重组腺病毒pAdEasy-Osx感染C2C12细胞后,RT-PCR和Western blot检测结果证实,Osx基因可在该细胞中转录和表达。与正常细胞相比较,感染细胞增殖率明显上升,G1和G2期的细胞数减少,S期的细胞数增加。 结论:成功构建表达Osterix的重组腺病毒;Osterix具有促进C2C12细胞增殖的作用。


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