重组Osterix腺病毒的构建及其对成骨细胞周期影响的初探

【摘要】：目的：探索腺病毒表达系统构建的条件，并以此为基础初步研究Osterix对C2C12细胞周期的影响。 方法：采用RT-PCR方法克隆Osterix基因片段，重组到腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV中，经Pme Ⅰ酶切线性化之后与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1用电穿孔法共转化进入大肠杆菌BJ5138，进行同源重组。经Pac Ⅰ酶切鉴定后，用脂质体法转染进入293A细胞，包装成重组腺病毒pAd-Osx。扩增、收集病毒颗粒，检测病毒滴度。感染C2C12细胞，用RT-PCR和Western Blotting检测目的基因的转录和表达。用流式细胞仪分析Osx基因对C2C12细胞周期的影响。 结果：成功构建Osterix重组腺病毒载体。收获病毒后，经测定病毒颗粒的滴度大约为2.25×10~8v·p／ml。将上述重组腺病毒pAdEasy-Osx感染C2C12细胞后，RT-PCR和Western blot检测结果证实，Osx基因可在该细胞中转录和表达。与正常细胞相比较，感染细胞增殖率明显上升，G1和G2期的细胞数减少，S期的细胞数增加。 结论：成功构建表达Osterix的重组腺病毒；Osterix具有促进C2C12细胞增殖的作用。