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敌百虫诱导近江牡蛎(Crassostrea hongkongensis)HSC70基因表达的定量研究

李春勇  
【摘要】: 海洋环境污染日益严重,分子水平的生物标志物,对污染物的反应快速灵敏,能指示分子生物标志物所在生物体所处环境的污染状态及其潜在危害,为严重毒性伤害提供早期预警,可以作为评估海洋环境健康状况的早期预警指标。 热休克蛋白,是高度保守的蛋白质家族,广泛存在于所有生物细胞(包括原核细胞及真核细胞)内。其中,海洋双壳类HSP70家族成员对环境污染物有广泛的反应性,且反应灵敏,是一类理想的海洋环境污染的潜在预警分子。 近江牡蛎广泛分布在近岸海域,是重要的海洋环境监测生物。我们以近江牡蛎为对象,采用荧光定量PCR技术研究了有机磷农药敌百虫诱导近江牡蛎潜在污染预警分子HSC70分子的表达情况。 为了建立研究HSC70基因表达的荧光定量PCR技术,首先研究了β-actin、18S rRNA、GAPDH三种看家基因在近江牡蛎不同组织中的表达情况,以确定合适的内参基因,结果表明:β-actin在鳃、外套膜、消化腺、闭壳肌四种组织中均表达稳定,是一种理想的内参基因,而18S rRNA、GAPDH两种看家基因的表达则具有组织特异性,不适合作为内参基因使用。 用不同浓度的敌百虫(0.5,0.2,0.05,0.01,0.001,0.0001 mg/l)处理近江牡蛎,分别于处理后3小时、7天、20天取样,研究闭壳肌、鳃、外套膜、消化腺等四种组织中HSC70的表达情况。 荧光定量PCR技术研究表明,近江牡蛎在敌百虫处理后,其HSC70的表达具有组织特异性;本次试验中,0.5 mg/l的敌百虫不能诱导鳃、外套膜、消化腺中HSC70显著表达,但能够诱导闭壳肌中HSC70的显著低表达;外套膜中诱导HSC70显著表达的敌百虫临界浓度在0.001-0.0001 mg/l之间,消化腺和闭壳肌中在0.01-0.001 mg/l之间。极低浓度的敌百虫(0.0001 mg/l)仍然能够诱导鳃中HSC70显著高表达,表明HSC70对敌百虫的的刺激反应非常灵敏,也表明在本次研究的四种组织中,鳃对敌百虫反应最敏感,在生物监测时,是一种比较合适的组织材料。研究结果显示HSC70作为有机磷农药敌百虫的污染预警分子反应灵敏。


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