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白念珠菌菌丝相与酵母相ERG11基因及胞外水解酶活性差异的探讨

姜红浩  
【摘要】: 1目的 比较白念珠菌菌丝相与酵母相ERG11基因及胞外水解酶活性之间的差异,拟为在体外对该菌进行病原真菌学研究时选择合适菌相提供理论依据。 2方法 将16株同一亲本来源、对氟康唑敏感性不同的白念珠菌(CA-1、CA-2、……、CA-9、CA-11、CA-12、……、CA-17)进行菌丝相与酵母相培养后,分别抽提基因组DNA,设计一对引物以PCR扩增ERG11基因,纯化后分别用AccⅠ、MunⅠ、AflⅡ消化,琼脂糖凝胶电泳后比较两相细胞RFLP图谱;用下游引物对ERG11基因纯化产物进行反向测序;分别用牛血清白蛋白培养基(BSA)和卵黄琼脂培养基(EYM)测定两相细胞分泌性天冬氨酸蛋白酶活性(PA值)和磷脂酶活性(PZ值),PA和PZ值等于菌落直径与总直径(菌落直径+BSA上透明圈或EYM上白色沉淀圈)的比值,采用配对t检验对两相细胞PA值和PZ值进行统计学分析。 3结果 3.1 AccⅠ、MunⅠ、AflⅡRFLP图谱及基因测序结果均显示菌株CA-7、CA-8、CA-14、CA-16、CA-17的菌丝相与酵母相ERG11基因间存在差异,其余菌株(CA-1、CA-2、……、CA-6、CA-9、CA-11、CA-12、CA-13、CA-15)两相间未见差异。 3.2 CA-7、CA-8、CA-14、CA-16和CA-17菌丝相与酵母相ERG11基因第1547位点、1587位点和1617位点的碱基存在差异,位点编号按照基因库中ERG11基因序列编号(登录号X13296)。 3.3白念珠菌菌丝相与酵母相分泌性天冬氨酸蛋白酶活性的差异有统计学意义(t=4.980,P=0.000),前者强于后者(PA均值分别为0.464、0.547)。 3.4白念珠菌菌丝相与酵母相分泌磷脂酶活性的差异有统计学意义(t=5.867,P=0.000),前者强于后者(PZ均值分别为0.543、0.606)。 4结论 4.1白念珠菌菌丝相与酵母相ERG11基因间存在差异。 4.2白念珠菌菌丝相与酵母相体外分泌性天冬氨酸蛋白酶和磷脂酶的活性存在差异。 4.3结合既往研究(白念珠菌菌丝相是该菌在体内的主要致病形式)和本次实验结果,认为在进行白念珠菌体外研究时,选用其菌丝相(而不是酵母相)更能反映体内真实情况。


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