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盐酸克伦特罗、莱克多巴胺兽药残留免疫层析检测方法的研究

陈耀强  
【摘要】: 目的:研制盐酸克伦特罗(CL)、莱克多巴胺(RAC)胶体金免疫层析联卡快速检测试纸条,用于猪尿中盐酸克伦特罗、莱克多巴胺残留的检测。并初步建立RAC胶乳荧光免疫层析快速检测方法,以提高检测灵敏度。 方法:采用饱和硫酸铵沉淀法纯化RAC腹水,并用BCA试剂盒测定其抗体蛋白浓度。用柠檬酸三钠还原法制备胶体金;用胶体金标记上适当浓度的CL、RAC抗体。将标记好的复合物喷涂于结合垫上,羊抗鼠IgG包被在硝酸纤维素(NC)膜表面,作为质控线(C线),采用重氮法和活性酯法合成检测抗原CL-BSA和RAC-BSA包被在NC膜表面,作为检测线(T1和T2线)。检测过程中CL-BSA、RAC-BSA与待测样品中CL、RAC竞争结合有限的胶体金标记抗CL、RAC单抗,样品中的CL、RAC越多则其结合的标记抗体越多,则结合到T线的标记抗体越少,T线的显示越弱甚至消失,因此根据颜色直观显示检测的半定量结果。用同样方法,把标记物由胶体金换成胶乳荧光颗粒,利用其在紫外灯激发下发出荧光以判断结果,初步建立RAC胶乳荧光免疫层析快速检测方法。 结果:成功合成检测抗原CL-BSA和RAC-BSA。成功制备了30 nm颗粒大小均一的胶体金。建立了联卡检测盐酸克伦特罗、莱克多巴胺的胶体金免疫层析法,5分钟内即可用肉眼观察到结果;检测猪尿时,最低检测限CL和RAC的灵敏度都为5ng/mL;特异性高,CL, RAC, SAL等类似物之间没有交叉反应;稳定性好,室温下保存7周不失效。成功将RAC抗体标记上胶乳荧光颗粒,并初步建立RAC胶乳荧光免疫层析快速检测方法,于紫外灯下以对比法判读结果,灵敏度可达到0.5 ng/mL。 结论:本研究建立的盐酸克伦特罗(CL)、莱克多巴胺(RAC)胶体金免疫层析联卡快速检测试纸条操作便捷,稳定可靠,灵敏度高,可作为猪尿中盐酸克伦特罗(CL)、莱克多巴胺(RAC)残留现场检测和监控的有效手段。初步建立了灵敏度更高的RAC胶乳荧光免疫层析快速检测方法。


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