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FR联合MA抑制HepG2肝癌细胞侵袭能力的实验研究

刘福丹  
【摘要】: 目的: 1.观察FR/MA对HepG2细胞增殖、侵袭能力的影响,同时考察两药联用时,药物之间所存在的相互作用。 2.初步探讨FR/MA抑制HepG2肝癌细胞侵袭可能的作用机制。方法: 1.MTT法检测FR/MA单用及联用对HepG2细胞增殖的影响。 2. Transwell侵袭小室测定法检测经FR/MA单药及联合用药处理过的细胞其侵袭能力的改变。 3.采用RT-PCR分析侵袭转移相关基因nm23-H1、Tiam-1表达的变化。 4.采用明胶酶谱分析法对药物作用前后HepG2细胞分泌的MMP-2和MMP-9活性进行分析。 5.应用Western blot检测药物作用后MMP-2和MMP-9蛋白表达的变化。结果: FR/MA单药及联合用药均能明显抑制HepG2的增殖,明显降低细胞侵袭能力,联用抑制效果更明显。细胞内nm23-H1基因mRNA水平有不同程度的升高,而Tiam-1基因mRNA水平有不同程度的降低。Western Blot结果显示,在药物作用48h后,对照组、FR(30μg/ml)组、MA(500μg/ml)组、同浓度FR+MA联合组的MMP-2蛋白相对值分别为0.99±0.01、0.55±0.03、0.67±0.02、0.35±0.02;MMP-9的相对值为0.82±0.02、0.29±0.03、0.45±0.01、0.18±0.01。明胶酶谱分析结果显示,FR(30μg/ml)组、MA(500μg/ml)组、同浓度FR+MA联合组明胶酶的活性明显低于对照组(P0.05);与FR(30μg/ml)组、MA(500μg/ml)组相比较,FR+MA联合组明胶酶活性降低得更明显(P0.05)。结论: FR、MA单用或者联用可以明显抑制肝癌细胞HepG2的增殖、侵袭能力,其中联用效果更佳。FR、MA抑制HepG2细胞侵袭的生物学行为,其作用机制可能为:通过上调nm23-H1基因,下调Tiam-1基因的表达和抑制MMP-2,MMP-9表达水平与活性而发挥抗肿瘤侵袭作用。


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