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鼻咽癌鼠移植瘤建立及鼻咽癌病人免疫状况研究

陈志坚  
【摘要】: 为了进行EB病毒特异性免疫和鼻咽癌免疫治疗的实验研究,首先 建立三个人鼻咽癌鼠移植瘤及相应的体外培养细胞株作为实验材料及 模型,并了解其相应特性,同时了解鼻咽癌病人基础免疫状况及针对 EBV特异性免疫状况,为研究提供基础。 第一部分: 用BALB/C裸小鼠(鼠龄7周~12周,体重>21g,雌雄兼用,)和Scid 小鼠(鼠龄4周~12周,体重19~30g,雌雄兼用)作为人鼻咽肿瘤移植 宿主。从26例未治疗鼻咽癌患者鼻咽部咬取鼻咽肿瘤组织,切成1-2mm 直径小块后,用套管针将小块肿瘤组织移植于实验鼠的肩部或腋窝皮 下,原代接种14例于裸鼠(16只,21部位)、12例于scid小鼠(13 只,14部位)。 分别了解以上瘤株的一般生物学特性,包括移植成功率、生长速 度、移植瘤大体形态学表现、光学显微镜和透射电镜下形态学表现、 染色体情况。了解以上瘤株中EB病毒LMP-1和LMP-2表达情况,用免 疫组化二步法检测CSNET-1、CSNET-2、CSNET-3、CSNE-1和CSNE-2的 LMP-1表达,用免疫组化ABC法检测CSNET-1、CSNET-2、CSNET-3的 LMP-2表达情况,间接免疫荧光法检测CSNE-2的LMP-2表达情况。 结果:建立人鼻咽癌鼠移植瘤3株,分别暂定名为CSNET-1、CSNET-2 和CSNET-3。CSNET-1原代在裸鼠建立传3代后移至Scid小鼠传代, CSNET-2和CSNET-3均在Scid小鼠建立并传代。以上三个移植瘤株已 分别传至第11、14、9代,成瘤率为91%(39/43)、97%(29/30)、94% (34/36),中位成瘤潜伏期为23、38、20天,最长荷瘤时间93、38、 44天。分别由CSNET-2、CSNET-1第4代、第9代成功培养出体外可连 续传代鼻咽癌细胞株,暂命名为CSNE-2和CSNE-1,已传至40代(30 个月)及26代(12个月)。以上移植瘤和细胞株染色体为人染色体, 均为超二倍体并有多种染色体结构畸变。三个移植瘤株光学显微镜及 电镜下形态符合低分化鳞癌表现,CSN盯l在电镜下可见成熟EB病毒 样颗粒。 免疫组化二步法检查结果“m卜1、“m卜2、q阳肝3、“m-1、 CSNE-2均有 LMP-1表达,ABC ?k检测 CSNET-1、CSNET-2、CSNET-3有 LMP-2表达,间接免疫荧光染色可见 CSNE-2细胞有 L)!PZ 表达(CSNE-1 未检人 第二部分: 取25例健康人和 58例鼻咽癌患者外周肝素抗凝血5ml,分离外周 血单核细胞KBMC)后,用间接红细胞花环法检测T淋巴细胞亚群。 结果:鼻咽癌患者的 T细胞总数CD3一较健康人少门.8士 4.3 对 58.3士 3.0,t=6.sl,p=0.00L 其细胞免疫功能也较健康人差 (CD4+/CDS十为1.13土0.24对工.41土0.18,rts.28,p=0.00),以上差 异有统计学显著性意义。 取18例健康人、17例鼻咽癌病人、2例其它恶性肿瘤病人外周肝 素抗凝血5ml,分离外周血单核细胞泽BMC人 用酶联免疫斑点试验 (ELISPOT)检测LMPZ特异性JL,所用WP-2肽段为0G、LLW气孔Y。 LLS、LTA。 37例ELISPOT检测结果,有16例对全部5个肽均呈阳性反应,其 中健康人占13例,鼻咽癌病人占3例;有14例对全部肽均呈阴性反 应的,其中鼻咽癌病人占11例,其它癌症病人占2例,而健康人只占 1例;另有7例只对部分肽段呈阳性反应。鼻咽癌病人T细胞对LMPZ 肽段反应阳性的比例明显低于健康人,二者差异有高度显著性意义(X ‘二14.7,P<0.01)。 结论: 本研究结果表明,CSNET-1、CSNET-2、CSNET-3、CSNE-1、CSNE-2 为来源于人鼻咽癌的鼠移植瘤和体外培养细胞株,可在SCN小鼠和体 外培养体系中稳定传代,它们具有和人鼻咽癌相同的组织学特性并且 有用病毒的w卜1和匕正f表达,可作为鼻咽癌免疫治疗实验研究的 理想材料和模型。本研究初步结果提示,鼻咽病人的一般免疫状况和 对EBV的特异免疫能力均较健康人低下,LMP七可作为刺激EBV特异性 CTL的抗原。


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