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肝癌细胞与树突状细胞杂交瘤苗的实验研究

张娟  
【摘要】: 目的 制备小鼠肝癌H_(22)细胞与树突状细胞(DC)相融合、经筛选获 得新的高表达共刺激分子的杂交瘤苗H_(22)-DC,并分析H_(22)-DC的生物 学特性及诱导特异性CTL活性。 方法 利用Metrizamide密度梯度离心及DC的半粘附性和FcR~-直 接从小鼠脾脏中分离出纯度较高的DC;再用粒细胞-巨噬细胞集落刺 激因子(GM-CSF)和白细胞介素-4(IL-4)共培养,诱导DC扩增, 以获得大量的DC;用聚乙二醇(PEG)使DC与肝癌H_(22)细胞融合, 并用CD11c MicroBeads标记,Mini MACS磁式细胞分选器分选融合 细胞(H_(22)-DC)。应用细胞培养技术、免疫细胞化学技术及光镜技术 检测H_(22)-DC的生长特性和形态学特征;从BALB/C小鼠右腋皮下接 种H_(22)-DC,观察体内致瘤性并用MTT比色法检测小鼠脾CTL活性。 结果 ①分离扩增的DC为CD11c阳性细胞,形态不规则,并高 表达CD80、CD86和CD54分子;H_(22)细胞为CD11c阴性细胞,呈圆 形,胞体较大,不表达CD80、CD86和CD54分子。H_(22)-DC为CD11c 阳性,细胞体积较大,呈圆形、扁平或不规则形,,也高表达CD80、 CD86和CD54分子。②H_(22)-DC在体外能分裂增殖,但生长曲线较平 坦,增殖活性明显低于H_(22)细胞。③H_(22)-DC接种于小鼠体内超过60 天仍未见肿瘤形成,与对照组有高度显著性差异(P<0.01)。④接种活 H_(22)-DC的免疫小鼠,其针对H_(22)细胞的脾CTL活性明显高于对照组 小鼠(P<0.01)。 结论 ①经Metrizamide密度梯度分离和GM-CSF、IL-4联合扩增 的小鼠脾DC为形态和功能成熟的DC。②采用PEG融合、CD11c磁 汕头大学医学院硕士学位论文 殊标记、Mini MACS分选法获得的HZ。DC兼具两种亲本细胞的某些 特性,方法简便可靠,有实用价值。③HZ。0C增殖活性明显降低,且 无体内致瘤性,已失去其亲本H22细胞的恶性生长特征。④H22*C能 明显激活小鼠脾特异性的CTL活性,提示融合细胞己获得亲本DC提 呈抗原的功能,可提呈目前尚未鉴定的H。。特异性肿瘤抗原,诱导抗 肿瘤兔疫;H22与DC简单混合虽然也能明显激活特异性的CTL活性, 有一定抑制肿瘤生长的作用,但不能阻止肿瘤形成。表明DC瘤苗有 望成为肝癌免疫治疗的一条新途径。


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