氟哌啶醇季铵盐衍生物（F_2）对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用及对大鼠心室肌细胞膜L-型钙通道电流的影响

【摘要】： 氟哌啶醇(Haloperidol，Hal)为临床上常用的抗精神病药物，以往的一些研究表明Hal有扩张血管及抗心肌缺血的作用，但Hal伴发的严重的锥体外系的不良反应妨碍了进一步的观察，因而将其结构进行改造，制得了一种结构全新的氟哌啶醇季铵盐衍生物(F_2)。F_2因增大了极性，不易透过血脑屏障，因而避免了中枢的不良反应，而又保持了外周心血管的活性。研究表明，F_2具有扩张冠状动脉，对抗脑垂体后叶素所致大鼠心电图的缺血改变；拮抗KCL诱导的猪冠脉螺旋条的收缩；减低胸主动脉平滑肌细胞内钙浓度；还可能具有开放钾通道的作用。为了观察F_2在整体条件下的作用，以及进一步阐明其扩张血管及抗心肌缺血的作用机制，本研究采用大鼠心肌缺血再灌注损伤的整体动物模型，以维拉帕米(Verapamil，Ver)为阳性对照药，从整体水平研究F_2对心肌缺血再灌注损伤的保护作用；采用膜片钳全细胞记录技术，研究F_2对酶急性消化分离的大鼠心室肌细胞膜L-型钙通道电流的影响，从离子通道水平研究F_2心血管活性的机制。 一．F_2对心肌缺血再灌注损伤保护作用的研究 1．F_2对大鼠心肌缺血再灌注损伤心肌酶、SOD、MDA的影响结扎大鼠冠状动脉左前降支30分钟，再灌注30分钟，造成心肌缺血再灌注损伤的整体动物模型，于缺血前舌下静脉注射阳性对照药Ver(2mg．kg~(-1))、不同剂量F_2(1mg．kg~(-1)，2mg．kg~(-1),4mg．kg~(-1))。再灌注结 束后，心腔内采血，测定血清肌酸激酶（CK人肌酸激酶同工酶MB 瞩K－MB人乳酸脱氢酶几DHL a－羟丁酸脱氢酶（HBDH人谷草 转氨酶（GOT人 丙H醛（MDA）的含量，超氧化物歧化酶3OD） 活性。结果发现，缺血再灌组与假手术组相比，反映心肌损伤的心肌 5 酶CK、CK－MB、LDH、HBDH、GOT明显增高，SOD活性明显降 低，MDA含量明显增高0功．01 vs shs gyollph Ver可以减少缺血 再灌注损伤时心肌酶CK、CK－MB、LDH、HBDH、GOT的增高，提 高 SOD的活力，减少脂质过氧化物 MDA的产生中＜0刀 IVS I／R gTOUpX FZ能呈量效依赖地降低由于缺血再灌注引起的心肌损害心肌酶CK、 CK－ND3、LDH、HBDH、GOT的释放，保护SOD的活性，降低MDA 的产生（p＜0＊5或 p＜0＊ IVS 皿 rOOp）。 2．FZ对大鼠。0肌缺血再灌注损伤心肌超微结构的影响 结扎大鼠冠状动脉左前降支30分钟，再灌注30分钟，造成心肌 缺血再灌注损伤的整体动物模型，于缺血前舌下静脉注射阳性对照药 Ver（Zms．ks勺、不同剂量F。（lins．ks二Zms．ks1，4ms．ks叫）。再灌注 结束后，迅速剪下心尖部缺血区小块心肌，用 2％戊二醛适量固定 10 分钟后，切成 Illnn，J’块，用 2．5％戊H醛固定，2％饿酸后固定，系列 乙醇脱水，PDAP包埋，醋酸铀和柠檬酸铅染色，做成超薄切片，在 透视电子显微镜下可观察缺血再灌注心肌的形态学改变。结果发现， ；在缺血再灌组，心肌细胞结构损伤严重，细胞水肿；肌丝排列紊乱， 肌膜破损，肌纤维部分溶解断裂；线粒体肿胀，结构模糊，蜡扭曲变 形，断裂；细胞核有染色质边集现象；闰盘断裂，结构破坏。在维拉 二 帕米组可见心肌细胞损伤明显减轻，肌丝排列规则，肌膜大多完整， 少部分破损；线粒体结构完整，峭大部分清楚整齐，闰盘结构完整， 无断裂，小部分细胞轻度水肿。F甫呈量效依赖的减轻心肌细胞由于 缺血再灌注损伤的形态学改变：肌纤维排列保持规则，肌膜几无破损， 】线粒体结构完整，线粒体崎清楚整齐，结构完整，细胞核无有染色质 边集现象，闰盘结构完整、清晰。 以上酶学指标和形态学的观察，说明FZ对大鼠心肌缺血再灌注损 伤具有保护作用。 二．FZ对大鼠心室肌细胞L－型钙通道电流的影响 采用酶急性消化分离的单个大鼠心室肌细胞，应用膜片钳全细胞 记录技术，在保持电压戳olding potential）为＊0mV，指令电位（去 一 极化电位，d即olarizing Potential）从－40 mV ～n－60m又梯度（stePs）为 10mV，刺激波宽（Duration）为 300ms的刺激参数下，用含 in moljL 的四乙按（TEA）的台氏液灌流时，记录出具有时间与电压依赖性的 内向电流。当加入 in mol几维拉帕米，可被明显抑制。用浓度为 1 n moMi F卜给予相同的刺激参数，发现 F。能抑制任何一膜电压下的 电流，并使最大峰电流从门乃．2＋76o．4 pA减少至464Q29．ipA（F7， p＜0．01），但原有的电流－电压依赖特征不变。说明 FZ心肌细胞膜 L－ 型钙通道具有阻断作用。 回 以上研究?