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抑癌基因PTEN在鼻咽癌中表达和突变的研究

杨海伟  
【摘要】:目的 PTEN基因是1997年发现一种新的肿瘤抑制基因,定位于染色体10q23.3,具有双重特异性磷酸酶活性,参与调控细胞的生长发育和细胞的凋亡,影响肿瘤细胞的浸润、转移和骨架蛋白的组装,对细胞的信号转导和其他生物过程有着重要作用。目前发现PTEN的突变或杂合性缺失与多种肿瘤的发生发展有着密切的关系。鼻咽癌是广东省高发肿瘤,发生有明显的地域性和家族集聚现象,且存在基因组不稳定的特性,其发生发展和转移涉及多种癌基因和抑癌基因的相互作用。本实验主要通过对鼻咽癌组织和细胞株抑癌基因PTEN蛋白和基因水平的检测,观察在鼻咽癌的发生和恶性转化中PTEN表达和突变情况,探讨PTEN作用的机理及PTEN与鼻咽癌发生发展之间的关系,为鼻咽癌的基因诊断和治疗提供新的方法。 方法 采用免疫组织化学方法、流式细胞技术、激光共聚焦显微镜方法、蛋白印迹法和银染聚合酶链—单链构象多态性技术等对不同组织类型和病理分级鼻咽癌及癌旁组织及人鼻咽癌高分化细胞株CNE1和低分化细胞株CNE2中PTEN的蛋白表达和基因杂合缺失情况进行检测,从蛋白和基因水平分析鼻咽癌细胞恶性转化过程中PTEN缺失和突变情况。 结果 鼻咽癌组织中有PTEN的表达,定位于胞浆和胞核;鼻咽鳞状细胞癌PTEN的阳性表达率低于其他组织类型(未分化型非角化癌和分化型非角化癌),PTEN的阳性表达率随着分化程度的降低而减少,临床分期早期PTEN的阳性表达率高于晚期(P<0.05)。鼻咽癌两种细胞株均有PTEN的表达,定位于细胞胞核和胞浆;高分化细胞株CNE1中PTEN蛋白阳性细胞数、细胞株平均荧光表达强度和细胞株平均光密度值均强于低分化细胞株CNE2(P<0.05);高分化细胞株CNE1中细胞核荧光强度/细胞平均荧光强度、细胞核平均光密度均低于CNE2细胞株(P<0.05)。PTEN在第7外显子没有突变发生,第8外显子在15例鼻咽癌组织中有1例发生突变,突变率为6.67%,PTEN在鼻咽癌细胞株中没有突变。 结论 PTEN蛋白在鼻咽癌及癌旁组织、鼻咽癌细胞株CNE1,CNE2中定位于细胞浆和细胞核。PTEN在CNE1,CNE2两种分化程度不同的细胞株中表达和定位有差别,在细胞恶性转化过程中PTEN的表达率的降低,并且细胞核表达相对增加。PTEN在鼻咽癌组织上皮细胞恶性转化过程中的缺失是不均匀的;PTEN蛋白表达的高低与肿瘤的组织类型、分化程度和临床分期有关;PTEN的缺失主要发生在鼻咽癌的晚期,在病变晚期作用明显,参与鼻咽癌的发生和发展。PTEN第8外显子在鼻咽癌中有突变,但突变率很低。


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