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阴道毛滴虫长寿保障基因Tv-LAG1的克隆和表达及衰老相关基因筛选

刘红  
【摘要】:研究目的 (1)克隆原生动物阴道毛滴虫(Trichomonas vaginalis) 长寿保障基因(Longevity assurance gene 1 LAG1)同源基因:Tv- LAG1。构建Tv-LAG1原核表达重组体及表达其融合蛋白。(2)在 模式生物阴道毛滴虫cDNA消减杂交文库中,筛选和鉴定阴道毛 滴虫细胞周期及衰老相关基因。材料和方法 (1)从阴道毛滴 虫cDNA表达文库中筛选LAG1的同源基因,并对其序列保守结构 域进行同源性分析。用pET41表达载体与Tv-LAG1 cDNA克隆构建 原核表达重组体,在异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(isopropylthio- β-D-galactoside IPTG)诱导下表达目的基因融合蛋白,Ni-NTA亲 和层析纯化表达产物,SDS-PAGE鉴定表达产物的分子量及纯化 效果。用纯化的融合蛋白免疫家兔,获得抗血清,采用Western blot 法对抗体特异性进行分析鉴定。(2)采用反转录PCR技术进一步 分析鉴定cDNA消减杂交文库中分离到的15个cDNA克隆。结果 (1)从阴道毛滴虫cDNA表达文库中成功筛选出长寿保障基因 LAG1的同源基因(Tv-LAG1)。其cDNA克隆含910对碱基,其编 码框长834 bp,推测蛋白质序列含有277个氨基酸。从植物到人 类的结构域序列分析提示,Tv-Lag1p与酵母Lag1p及其它同源蛋 白均有同源性。其中与拟芥兰相比,在258个氨基酸的序列区, 同源性达到23%。其次为人类Lag1p同源蛋白质,在216个氨基酸


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