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肺炎克雷伯菌和假单胞菌耐药机制研究

姚芬  
【摘要】: 1.目的 肺炎克雷伯菌和假单胞菌均是临床上常见的院内感染菌,均为呼吸道感染的主要病原菌。目前这两种菌种的临床分离率不断增加,耐药情况日趋严重,临床治疗也十分棘手。本研究的目的在于了解汕头地区肺炎克雷伯菌和假单胞菌的耐药情况及耐药机制,为临床合理应用抗生素提供理论依据。 1.方法 2.1收集产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌共74株,药敏试验了解其耐药情况,设计合成整合酶、Ⅰ型整合子可变区的上下游引物,煮沸法提取细菌总DNA作为模板,整合子可变区PCR扩增产物纯化、克隆后测序,所得序列翻译后在Genbank数据库进行比对分析。 2.2收集耐亚胺培南的铜绿假单胞菌,设计合成铜绿假单胞菌外膜蛋白OprD_2、IMP、VIM和SPM型获得性金属酶、PSE酶的上下游引物,煮沸法提取细菌总DNA作为模板,PCR技术筛选OprD_2、获得性金属酶和PSE酶基因阳性菌株。 2.3选取同一病人治疗前后临床分离株,随即扩增多态性DNA对菌株进行基因分型,选取同源性菌株,头孢西丁三相试验和头孢西丁诱导试验检测AmpC酶产生情况。 2.4对临床上分离的一株对β-内酰胺类抗生素高度耐药的荧光假单胞菌,微量稀释法测定对多种抗生素的MIC,碱裂解法提取质粒DNA,金属酶及Ⅰ型整合酶引物扩增产物纯化测序。 3.结果 3.1产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌多为多重耐药株,其中69株IntI1基因阳性,未发现IntI2和IntI3基因。菌株1型整合子可变区包含11种不同的基因盒组合,共有13种不同的基因盒。Dfr和aadA基因盒最多见,DfrA12-orfF-aadA是最常见的基因盒组合,未发现编码ESBLs的基因盒。 3.2耐亚胺培南铜绿假单胞菌仅对头孢哌酮/三唑巴坦有较高敏感率,未发现产金属酶株。共有6株菌株产PSE酶。大多数菌株存在OprD_2基因突变。 3.3抗生素治疗前菌株多产诱导高产AmpC酶,抗生素治疗后,头孢他啶对菌株的MIC明显上升,菌株变成持续高产AmpC酶株。 3.4菌株对包括碳青霉烯类抗生素在内的β-内酰胺类抗生素高度耐药,对环丙沙星敏感,金属酶试验阳性,金属酶编码基因位于Ⅰ型整合子上,该整合子位于一个大小为20kb左右的质粒上,部分测序结果表明与IMP-8的氨基酸序列完全相同。 4.结论 4.1整合子在产ESBLs肺炎克雷伯菌的多重耐药中起重要作用,但与ESBLs的产生和播散无关。 4.2头孢哌酮/三唑巴坦可作为耐亚胺培南铜绿假单胞菌感染的经验性首选用药,铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药的原因主要是外膜蛋白表达缺失导致外膜通透性下降。 4.3临床治疗产诱导高产AmpC酶铜绿假单胞菌感染要避免使用对酶有诱导作用的β-内酰胺类抗生素。 4.4菌株为产IMP型金属酶株,位于1型整合子上,可能引起金属酶播散,同时,该菌可能存在其耐药机制。


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