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茶多酚诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡及机理研究

徐泽平  
【摘要】:目目的:研究茶多酚、茶多酚单体表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)、银杏叶提取物对人乳腺癌细胞增殖的影响;初步研究茶多酚与银杏叶提取物联用对体外人乳腺癌细胞的细胞毒效应;比较茶多酚与EGCG对MCF-7细胞增殖的抑制效果;探讨茶多酚诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的作用机理。 方法:采用MTT法测定茶多酚、EGCG、银杏叶提取物对人乳腺癌细胞增殖的抑制作用;应用吉姆萨染色法和Hoechst33258染色观察茶多酚、EGCG作用于MCF-7细胞的细胞形态;流式细胞仪检测茶多酚作用于MCF-7的凋亡率;WST法检测茶多酚对MCF-7细胞超氧化歧化酶(SOD)活性的影响;TBA法检测茶多酚对MCF-7细胞丙二醛(MDA)水平;JC-1法检测茶多酚对MCF-7细胞线粒体膜电位的影响;分光光度法检测茶多酚对MCF-7细胞Caspase3活性的影响。 结果:(1)MTT法结果表明,银杏叶提取物作用于人乳腺癌MCF-7细胞或者MDA-MB-231细胞,在低浓度时对细胞生长无抑制作用,高浓度具有明显的抑制作用;茶多酚、EGCG对MCF-7细胞或者MDA-MB-231细胞的增殖具有抑制作用;茶多酚作用MCF-7细胞48h时的IC50为56.68μg/mL,其中EGCG大约占有17.00~22.67μg/mL,而采用茶多酚单体EGCG,IC50为30.97μg/mL。茶多酚与银杏叶提取物联合作用于MCF-7细胞,抑制效果优于单独用药组;联合组在一定浓度范围内作用于MDA-MB-231细胞,抑制效果具有协同作用;在细胞形态方面,与单独用药组、对照组相比,联合用药组乳腺癌细胞生长状况差,折光性弱,贴壁细胞皱缩,变圆;EGCG组随着浓度的提高,MCF-7细胞的形态发生改变。(2)吉姆萨染色和Hoechst 33258染色结果显示茶多酚组细胞形态与对照组相比有显著差异,茶多酚组细胞变圆,胞核皱缩,染色质浓缩;流式细胞术检测到随着茶多酚浓度与作用时间的提高,用药组的细胞凋亡率明显高于对照组。(3)茶多酚能够显著降低胞内抗氧化酶SOD的活性,使胞内脂质氧化产物MDA水平升高;JC-1法结果显示80μg/mL茶多酚处理MCF-7细胞后线粒体膜电位下降;茶多酚处理MCF-7细胞后Caspase3活性降低,具有剂量依赖性和时间依赖性。 结论:(1)茶多酚、EGCG对人乳腺癌细胞MCF-7的增殖具有抑制作用,在一定浓度范围,茶多酚对MCF-7细胞的抑制效果优于茶多酚单体EGCG;(2)茶多酚与银杏叶提取物联用对MCF-7细胞在一定浓度范围内具有协同作用,联合组对MDA-MB-231细胞在低浓度有协同作用;(3)茶多酚诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的机理可能是通过降低胞内抗氧化酶SOD活性加重MCF-7细胞内的氧化应激压力,触发线粒体途径诱导细胞凋亡。


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