收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

酵母来源血管紧张素转移酶抑制多肽的制备及其抑制机理的研究

倪贺  
【摘要】:天然来源的生物活性多肽因其具有明显的生理功能和很好的生物相容性而被广泛应用于医药、保健、食品、化妆品等行业;血管紧张素转移酶(ACE)抑制多肽是降血压药物及保健品潜在的代替品之一。 本论文应用多酶复合水解、膜分离和层析分离获得了具有单一组成的ACE抑制六肽,并获得了六肽的氨基酸序列,探讨了其热稳定性和抗消化性能;进一步应用酶动力学、分子模拟、化学定点改性、结构生物学等技术手段阐述了抑制多肽与ACE的相互作用的分子机制,构建了六肽抑制ACE活性的机理模型,取得主要研究内容和结果如下: (1)酶解法制备酵母来源ACE抑制多肽。采用酵母水解酶提取并水解酵母蛋白质,当料液比为1:10(w/v)、加酶量为1%(w/w)时,在40℃提取2h的条件下,酵母蛋白质的提取效率达到最高,为81.32%±1.27%,此时,酵母蛋白质的水解度为23.38±1.26%;在酵母水解液中添加4倍乙醇可以较好地去除其中大分子杂质,核酸和多糖的去除率分别为87.9±1.74%和64.2±2.15%,蛋白质的损失率仅为6.88±1.28%;进一步超滤分级分离发现透过截留分子量为10kDa的超滤膜的组分活性最高,对该组分依次采用凝胶柱层析和阴离子交换柱层析后获得了一种ACE抑制活性较高的多肽组分AP1。 (2)ACE抑制多肽的结构鉴定和性能测试。基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱分析(MALDI-TOF-MS)和氨基酸N端测序结果表明,AP1是计算分子量660Da的单一组成多肽,其氨基酸组成为Thr-Pro-Thr-Gln-Gln-Ser;AP1对ACE的半抑制浓度(IC_50)为0.11μmol/mL,与已知的食源性ACE抑制多肽相比,AP1具有更高的ACE抑制活性;酶抑制动力学和等温滴定量热分析表明,AP1对ACE的抑制为非竞争性抑制,AP1不能改变ACE催化反应的米氏常数Km值,但可以改变酶反应的最大反应速率Vmax;采用本文建立的反相-高效液相色谱法(RP-HPLC)探讨了AP1的的热稳定性及抗消化性能,发现RP-HPLC法定量分析AP1具有较好的准确度和精确度,AP1的水溶液在37℃-60℃具有良好的热稳定性,能够抵抗人工胃液和人工肠液的消化。 (3)AP1对ACE非竞争性抑制机理的研究。应用分子对接技术建立了AP1与ACE的分子对接结构模型,根据AP1与ACE活性中心间的相互作用确定了影响AP1活性的关键氨基酸残基,采用化学定点改性AP1的方法获得残基性质不同或肽链长度不同的改性多肽,并考察改性对多肽ACE抑制活性的影响规律,结果表明AP1的C-末端的Ser6与其抑制ACE活性有直接关系,而N-端的Thr1、Thr3、Gln4则是AP1作为ACE非竞争性抑制剂的结构基础,在解析AP1抑制ACE活性的分子机制的基础上构建了相关的机理模型,AP1的N-端的Thr1、Thr3和Gln4将其锚定在ACE亚结构域Ⅰ的盖子结构上,C-末端的Ser6则吸引ACE活性中心的Zn~(2+)使其位置发生偏离,因此,结合了AP1的ACE虽然能继续与底物HHL结合,但是由于催化过程缺少Zn~(2+)的参与而不能将HHL催化生成HA。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 张国亮;冀朵朵;金苏;王德纯;孙爱东;张柏林;;乳酸菌抑制ACE及病原菌代谢产物研究进展[J];食品工业科技;2009年11期
2 潘道东;;抗ACE活性之瑞士乳杆菌的筛选[J];食品科学;2007年02期
3 刘志国;陈江源;王亚林;刘生毅;;玉米醇溶蛋白酶解制备ACE抑制肽的研究[J];食品研究与开发;2006年02期
4 王瑛瑶;王璋;;花生水解蛋白液的浓缩及体外活性研究[J];食品科学;2007年01期
5 梁卫国;田锦;;ACE工艺在氮肥生产企业废水处理工程中的应用[J];中国农村水利水电;2009年08期
6 程德蓉;李昌贵;刘敬强;;一个基于ACE的微总线的设计与实现[J];重庆科技学院学报(自然科学版);2006年04期
7 李敏晶;韩艳玲;谭成玉;刘远;;海燕皂苷抑制ACE活性的研究[J];广东化工;2011年10期
8 李筱泉;何群;练惠辉;王勤;;南瓜粉的功能研究[J];食品科学;2008年10期
9 黄克功;;ADSP21161在ACE数控测井仪中的应用[J];石油仪器;2010年01期
10 张伟;孙智达;徐志宏;;花生多肽的制备及生理功能评价的研究进展[J];中国油脂;2007年01期
11 刘立闯;胡志和;贾静;刘彤;;螺旋藻藻胆蛋白水解产物对ACE抑制活性的研究[J];食品科学;2009年13期
12 王昌涛;马正创;王惠;董银卯;;乳清蛋白酶解工艺条件的研究[J];食品科技;2009年08期
13 梅林;王志耕;王子龙;薛秀恒;;胰蛋白酶水解β-乳球蛋白获得ACE抑制肽的条件优化[J];天然产物研究与开发;2011年02期
14 王冠博;王侃;余纲林;;热化截面库SabDEP制作与热化截面插值方法[J];原子能科学技术;2011年07期
15 侍嵘;徐海晖;;论船舶检验与船舶安全检查工作的有效衔接[J];中国水运(下半月);2011年08期
16 王亚林;食品蛋白质降血压肽(ACEIP)的开发研究[J];粮食与饲料工业;2003年11期
17 张世扬;肖振贤;赵建龙;肖君华;曹慧敏;;基于连接酶检测反应的并行分型系统检测AGT M235T和ACE I/D基因多态性[J];华东理工大学学报(自然科学版);2006年09期
18 姜瞻梅;田波;吴刚;霍贵成;;酶解牛乳酪蛋白制备ACE抑制肽的研究[J];中国食品学报;2007年06期
19 蒋宇,邵蔚蓝;嗜热厌氧产乙醇杆菌乙醇代谢途径的初步研究[J];南京师大学报(自然科学版);2005年03期
20 张丽萍;李志江;王立东;;糙米酵素发酵剂筛选分离及应用研究[J];中国食品添加剂;2006年01期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 周贺霞;马良;张宇昊;;酶法生产鱼皮胶原蛋白ACE抑制肽的研究[A];管产学研助推食品安全重庆高峰论坛——2011年中国农业工程学会农产品加工及贮藏工程分会学术年会暨全国食品科学与工程博士生学术论坛论文集[C];2011年
2 高秀君;闫培生;史翠娟;董静;;梭柄松苞菇ACE抑制活性研究[A];2010年中国菌物学会学术年会论文摘要集[C];2010年
3 王江;田颖;聂凌;宋熔;谭红梅;祝善俊;;心力衰竭患者心肌组织ACE2表达与心功能的关系[A];全国第十二届心脏学会第十五届心功能学会和《心脏杂志》编委会联合学术会议论文集[C];2011年
4 ;The Role of Angiotensin-converting Enzymes(ACE and ACE2) Imbalance on Remote Kidney Injury Induced by Tourniquet Shock in Mice[A];第八届海峡两岸心血管科学研讨会论文集[C];2011年
5 倪贺;郭莎莎;胡松青;张才军;叶就;李琳;苏健裕;;酵母来源ACE抑制多肽的制备[A];2010年中国农业工程学会农产品加工及贮藏工程分会学术年会暨华南地区农产品加工产学研研讨会论文摘要集[C];2010年
6 李鹏飞;马畅;张伟;刘仪;张源淑;;ACE/ACE2在SHR大鼠心脏中的表达差异及与高血压的关系[A];全国动物生理生化第十一次学术交流会论文摘要汇编[C];2010年
7 云美玲;;海南地区汉族、黎族冠心病患者群ACE基因多态性的对比分析[A];第十三次全国心血管病学术会议论文集[C];2011年
8 赵元晖;李八方;董士远;刘尊英;赵雪;王静凤;曾名湧;;海地瓜蛋白水解物中ACE抑制肽的分离纯化及合成[A];2010年中国水产学会学术年会论文摘要集[C];2011年
9 刘颖;;ACE方法与模型实例简介[A];“资源环境与区域发展中的计算问题”研讨会论文集[C];2006年
10 云美玲;;海南汉族ACE基因多态性与高血压左室肥厚左心室功能的相关研究[A];第十三次全国心血管病学术会议论文集[C];2011年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 倪贺;酵母来源血管紧张素转移酶抑制多肽的制备及其抑制机理的研究[D];华南理工大学;2012年
2 李刚;ACE2激活对大鼠重度肺动脉高压的影响及机制研究[D];北京协和医学院;2012年
3 张艳萍;贻贝蛋白中ACE抑制肽的制备及其构效关系研究[D];浙江工商大学;2011年
4 胡蕙蕙;过表达血管紧张素转化酶2基因预防低氧性肺动脉高压的研究[D];浙江大学;2012年
5 田清青;壳聚糖固定化血管紧张素转化酶的制备及其应用[D];湖南师范大学;2012年
6 周红丽;南瓜籽蛋白血管紧张素转化酶抑制肽的研究[D];湖南农业大学;2012年
7 黄茂梁;ACE2-Ang-(1-7)-Mas轴对肝星状细胞胶原合成的影响及其信号转导机制研究[D];南方医科大学;2010年
8 王康;APOBEC3B基因缺失和ACE基因Alu插入之间关系的研究[D];吉林大学;2013年
9 卜乐;调控ACE2表达对糖尿病肾病Ⅰ型胶原代谢的影响及作用机制研究[D];第二军医大学;2010年
10 曲海燕;牵张力调节血管平滑肌细胞ACE2表达的分子机制及其介导的生物学效应研究[D];山东大学;2012年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 蒋予川;酶解军曹鱼头制备ACE抑制肽的研究[D];广东海洋大学;2010年
2 范茜君;ACE基因多态性与纳西族脑血管病患者的相关性研究[D];昆明医学院;2010年
3 宋晶;人参ACE抑制蛋白提取工艺的优化及生物活性研究[D];吉林农业大学;2011年
4 王玉霞;鸡骨肽制备及其ACE抑制活性研究[D];中国农业科学院;2011年
5 于志鹏;蛋清源ACE抑制肽的结构鉴定及稳定性研究[D];吉林大学;2011年
6 王硕;甘薯ACE抑制肽的制备及其降血压活性研究[D];中国农业科学院;2011年
7 张子健;干酪乳杆菌D400产ACE抑制肽的研究[D];河北农业大学;2010年
8 王前胜;ACE2基因表达增加对血管紧张素Ⅱ作用下人脐静脉内皮细胞增殖、凋亡的影响[D];福建医科大学;2010年
9 郑三福;ACE2基因过度表达抑制大鼠平滑肌细胞AT1受体表达[D];福建医科大学;2011年
10 卢辉耀;ACE2基因转染对VSMC血管紧张素Ⅱ1型受体mRNA表达的影响[D];福建医科大学;2010年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 记者 高新军;ACE研究开拓心血管病二级预防新领域[N];中国中医药报;2009年
2 高国起;提升ACE2活性可消退动脉硬化斑块[N];中国医药报;2010年
3 谢柳;美国ACE集团称未受金融危机影响[N];中国保险报;2008年
4 记者 段佳;外资成为华泰第一大股东[N];中国保险报;2002年
5 本报记者 欧阳晓红;AIG教训与ACE经验[N];经济观察报;2009年
6 羽舟;ACER稳居第一军团[N];中国计算机报;2002年
7 张蓓;ACE人寿拓展亚洲业务[N];中国保险报;2010年
8 记者 林龙;联合技术:ACE助力企业可持续发展[N];第一财经日报;2010年
9 边际;中航工业与UTC高层研讨ACE领导力[N];中国航空报;2011年
10 本报记者 秦力勇;西班牙ACE集团CEO来绵考察[N];绵阳日报;2011年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978