猪源大肠杆菌耐药表型和基因型研究

【摘要】：猪肉是我国最主要的肉类以及肉制产品原料。伴随着抗生素在疾病防治和饲料添加中的广泛使用,猪源大肠杆菌对其抗生素耐药性日益严重。耐药菌株可感染生猪、污染猪肉进一步通过食物链将其耐药性传播至人类,造成严重的食品安全和公共卫生问题。本研究从广州某生猪养殖场中的腹泻仔猪、健康仔猪以及猪圈环境中采集样本共147份,根据GB 4789.6-2016对样本进行大肠杆菌分离鉴定,采用纸片扩散法(K-B)对分离菌进行11种抗生素敏感实验,PCR方法检测耐药大肠杆菌携带的耐药基因,并用接合转移实验探究大肠杆菌的耐药性水平转移情况。具体内容如下:1、采样共147份,分离率为78.23%。腹泻仔猪的粪便、鼻拭子等样本中,大肠杆菌的分离率为85.57%;健康仔猪的粪便、鼻拭子等样本中,大肠杆菌的分离率为89.29%;而猪圈环境的地面、饮用水以及饲料样本中,大肠杆菌的分离率为78.23%。2、通过K-B法对分离菌株进行环丙沙星、氨曲南等11种药物药物敏感性试验,所有菌株对复方新诺明耐药最严重,耐药率接近100%;对喹诺酮类抗生素左氧氟沙星、加替沙星、环丙沙星有较高的耐药率,分别为53.91%(62/115)、48.70%(56/115)、36.52%(42/115);本次分离菌株的多重耐药菌数达46.09%(53/115),所有菌株对美罗培南敏感。3、本实验的耐药基因PCR结果显示,四环素类tetM基因的检出率最高,检出率达100%;aac(3')-Ⅰb、aac(3)-Ⅱb、bla_(TEM)、ant(3'')-Ⅰa、bla_(CTX)、sul1的检出率较高,分别为84.62%、84.62%、73.81%、73.08%、61.90%、54.39%;喹诺酮类耐药基因qnrB、qnrS、aph(3')-Ⅱa的检出率较低,分别为6.35%、14.29%、38.46%。本实验中所有分离菌中未检测到qnrA基因、tetK基因。4、53株多重耐药分离菌通过接合转移实验,39株分离株成功将耐药质粒转入受体菌E.coli J53中。对接合子进行喹诺酮类、β-内酰胺类等5类抗生素的药敏实验,PCR方法检测接合子携带的耐药基因。结果表明,接合子对抗生素耐药水平以及携带的耐药基因明显低于供体菌。本研究获得某生猪养殖场的猪源大肠杆菌对β-内酰胺类、喹诺酮类、氨基糖苷类等抗生素的耐药性以及耐药基因的分布规律,以期指导仔猪腹泻病的防治用药,同时进一步为防治食源性疾病的爆发提供数据支持。