收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

转基因鱼腥藻7120质粒稳定性研究及rhTNF-α表达的发酵条件优化

成静  
【摘要】:α型肿瘤坏死因子(α-TNF)是巨噬细胞产生的一种细胞因子,因具有抗肿瘤、抗病毒和免疫调节等多种生物学活性及功能,而具有广阔的临床应用前景。由于自然来源有限,重组TNF和其衍生物的研究迅速发展,其中由于蓝藻具有的诸多优点,如不含毒蛋白,本身富含多种保健成分,易培养等,使开发其成为TNF的新型宿主具有很好的商业价值。本研究在前人的基础上,得到已转入hTNF-α基因的鱼腥藻7120,为了产生更好的经济效益,研究了重组质粒的稳定性及其光异养和各种环境因子对其生长及表达的影响,旨在提高表达产量,推进其产业化进程。所得结果如下: 首先探索了鱼腥藻的短期保存方法:保护剂可以增强藻细胞对4℃低温的耐受力,其中4.0%的二甲亚砜加上4.0%的甘油效果最好;接种时,藻液滴加到斜面上均匀铺开利于后一步的保存;向斜面定期补充少许无菌水以避免干燥可保存较长时间。 外源质粒的转入会减慢鱼腥藻7120的生长速率:最佳的生物量收获时间与最大的TNF活性时间不同,大约在第16天,TNF活性达到最大值6.735×10~4U/mg,然后活性开始逐渐下降;添加新霉素对转基因鱼腥藻7120生长会造成一定的影响;建立了野生型鱼腥藻7120的敏感动力学方程,1ug/m(?)新霉素已到致死剂量;外源质粒PDC-TNF具有相当高的分裂稳定性和结构稳定性;在无选择压力新霉素存在下的传代培养过程中,TNF表达量会降低,这种降低是由于PDC-TNF质粒拷贝数减少而产生的,在无新霉素存在下,外源质粒拷贝数会大幅度降低,这是转基因鱼腥藻7120有益于自身生长和生理的一种调节机制。 光异养条件下可以显著提高转基因鱼腥藻7120的生长和TNF的表达。鱼腥藻7120只能吸收利用少数几种碳源,其中葡萄糖和蔗糖是不错的碳源。对于生长,最佳的碳氮源为6g/L葡萄糖、1.5g/L硝酸钠,高压灭菌方式灭菌;对于TNF的表达,最佳的碳氮源为6g/L蔗糖、1.5g/L硝酸钠。 有机氮源中,所试的几种氨基酸,只有精氨酸在光自养条件下可以促进藻细胞的生长,其它的氨基酸对藻细胞的生长有抑制作用;对TNF的表达,所试的几种氨基酸都没有促进作用。自养条件下,蛋白胨不仅可以促进藻细胞的生长,对


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 黄静;程立坤;刘倩;徐庆阳;谢希贤;陈宁;;L-色氨酸生产菌质粒稳定性工艺研究[J];发酵科技通讯;2011年01期
2 ;质粒研究与载体构建[J];生物技术通报;1993年11期
3 冯志彬;屈慧鸽;徐庆阳;程显好;张玉香;;L-苏氨酸生产菌质粒稳定性工艺研究[J];中国酿造;2008年16期
4 赵春光;程立坤;徐庆阳;谢希贤;陈宁;;大肠杆菌发酵生产L-色氨酸过程中的质粒稳定性[J];发酵科技通讯;2010年01期
5 ;质粒研究与载体构建[J];生物技术通报;1993年02期
6 李敬龙,冯雪东;基因工程在葡萄酒酵母菌种方面的研究[J];中外葡萄与葡萄酒;1998年03期
7 赵艳景;王颖;;鲨肝刺激物类似物sHSA原核表达载体质粒稳定性的考察[J];药物生物技术;2008年03期
8 梁世中;高河泳;关达治;;基因重组菌质粒稳定性的提高与苯丙氨酸发酵的研究[J];生物工程学报;1992年01期
9 田杰生,宋海琛,吴柏和,王珍芳,李季伦;高产稳产聚羟基烷酸的重组大肠杆菌的构建[J];微生物学报;2000年01期
10 彭其胜;李月红;雷连成;华芳;朱平;;IL-10_(23-57)-PE40分泌表达的初步研究[J];微生物学通报;2006年02期
11 苟斌全;张嗣良;储炬;王永红;庄英萍;黄华;李震;袁中一;;增强组成型重组大肠杆菌质粒稳定性的发酵策略[J];化学与生物工程;2008年10期
12 陈罗胜;殷润婷;徐寒梅;奚涛;;重组人内皮抑素工程菌菌种稳定性考察[J];生物加工过程;2008年06期
13 王杨;张志毅;杨胜利;吴汝平;;par区域的克隆及其对质粒pUC9稳定性的影响[J];生物工程学报;1992年02期
14 罗立新,黄志立,凌均建,杨汝德,梁世中;纳豆激酶基因重组表达载体的构建及其稳定性[J];华南理工大学学报(自然科学版);2001年04期
15 钟根深;石炳兴;吴祖泽;;重组大肠杆菌高密度培养[J];中国生物工程杂志;2005年S1期
16 姜立春;郭晓萍;涂朝勇;舒晓燕;阮期平;;重组嘧啶核苷磷酸化酶工程菌菌种的稳定性考察[J];华西药学杂志;2007年03期
17 韦平和,吴梧桐;色氨酸生物工程研究进展[J];药物生物技术;1998年03期
18 陈新爱,徐志南,沈文和,岑沛霖;固定化基因工程菌的培养和hEGF表达[J];化工学报;2003年07期
19 张晓明,焦新安,唐丽华,潘志明,黄金林,刘秀梵;下调bla表达提高pcDNA3·1+在重组菌中的稳定性[J];微生物学通报;2005年05期
20 蔡丰聚;徐英黔;;基因工程菌稳定性的若干影响因素[J];生命的化学;2006年05期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 朱学义;周兴良;张宏业;左维明;张明华;宋东辉;施定基;;转基因鱼腥藻在5升光生物反应器中的高密度培养[A];中国海洋湖沼学会藻类学分会第七届会员大会暨第十四次学术讨论会论文摘要集[C];2007年
2 刘志伟;郑穗平;张晨;郭勇;;转基因鱼腥藻712O生长与外源基因表达的条件忧化[A];中国生物化学与分子生物学会第八届会员代表大会暨全国学术会议论文摘要集[C];2001年
3 朱学义;左维明;宋东辉;张明华;张淑萍;施定基;;转基因蓝藻在100L光生物反应器中的培养[A];中国海洋湖沼学会藻类学分会第七届会员大会暨第十四次学术讨论会论文摘要集[C];2007年
4 宋东辉;张宏业;朱学义;张淑萍;施定基;;光周期和葡萄糖的相互作用对转基因鱼腥藻的影响[A];中国海洋湖沼学会藻类学分会第七届会员大会暨第十四次学术讨论会论文摘要集[C];2007年
5 龚永强;程安春;汪铭书;杨梅;张瑶;陈斌;;鸭IFN-α成熟蛋白基因原核表达、产物纯化和复性关键技术及其抗病毒活性[A];第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛论文集(下册)[C];2008年
6 赵兴贵;李清艳;陈翠丽;李爽;张琪;宋东辉;张越男;邓元告;施定基;;转重组人粒细胞集落刺激因子(hG-CSF)基因工程鱼腥藻的构建[A];中国生物工程学会2006年学术年会暨全国生物反应器学术研讨会论文摘要集[C];2006年
7 陈凡;何祥凤;王建辉;王慧敏;;HX2菌株生物学性状的初步研究[A];中国植物病理学会2004年学术年会论文集[C];2004年
8 杨梅;程安春;汪铭书;张瑶;龚永强;陈斌;;重组鸭α-干扰素基因工程菌表达条件的研究[A];第四届第九次全国学术研讨会暨饲料和动物源食品安全战略论坛论文集(下册)[C];2008年
9 杨荣玲;陈卫东;吴晓玉;刘学铭;;稀土对微生物生长的影响及其机制和应用研究进展[A];第九届全国稀土化学与湿法冶金学术会议专辑[C];2005年
10 张红星;李茜茜;叶婷;郑世学;李林;;降解有机磷化合物的大肠杆菌表面展示工程菌的构建与酶活分析[A];“环境与健康”学术研讨会论文摘要集[C];2007年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 成静;转基因鱼腥藻7120质粒稳定性研究及rhTNF-α表达的发酵条件优化[D];华南理工大学;2000年
2 李铁民;cglI基因复合体在钝齿棒杆菌中的功能和行为研究[D];中国医科大学;2007年
3 迟雷;基于过程控制优化的重组大肠杆菌高密度发酵研究[D];西北大学;2011年
4 陈向岭;同源重组技术在酿酒酵母表达载体构建中的应用[D];复旦大学;2005年
5 夏雨;枯草芽孢杆菌食品级表达系统的构建和分泌表达研究[D];江南大学;2007年
6 张小里;酵母系统超量生产代谢中间物和外源基因产物的应用基础研究[D];浙江大学;2002年
7 刘洋;中温α-淀粉酶编码基因剂量对其生产水平提升的重要作用[D];江南大学;2009年
8 陈新爱;基因工程菌培养若干重要问题的研究[D];浙江大学;2002年
9 丁庆豹;核苷磷酸化酶的克隆、表达与应用[D];华东理工大学;2010年
10 梁敏婷;利用Cre-loxP重组系统研究根瘤菌/农杆菌与寄主植物的分子互作[D];中山大学;2012年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 夏诏杰;提高重组酵母质粒稳定性和蛋白质产率的培养策略研究[D];西北大学;2002年
2 郑文超;重组大肠杆菌生产类人胶原蛋白高密度发酵调控与质粒稳定性[D];西北大学;2007年
3 冯燕;水稻胞质FBA基因在鱼腥藻7120中的表达及其对光合碳同化的调控[D];上海师范大学;2005年
4 杨维红;Ⅰ型菌毛对鼠伤寒沙门氏菌体内侵袭能力的影响[D];华中农业大学;2007年
5 唐丽华;稳定携带H5亚型禽流感病毒DNA疫苗的减毒沙门氏菌构建与鉴定及其免疫生物学特性研究[D];扬州大学;2006年
6 梁波;重组人白细胞介素-11工程菌的发酵条件研究[D];四川大学;2006年
7 况世昌;AIV-HA1与CTB的融合蛋白在苏云金芽胞杆菌表面的表达及其生物活性分析[D];华中农业大学;2012年
8 孟秀娟;L-色氨酸合成关键调控基因突变株的构建及其发酵条件的初步探究[D];吉林大学;2013年
9 王芳;重组大肠杆菌高效生产可溶性的人β防御素[D];浙江大学;2004年
10 吴晓文;苏氨酸基因工程菌噬菌体抗性菌株选育及摇瓶发酵工艺研究[D];福建师范大学;2011年
中国重要报纸全文数据库 前8条
1 丁锡申;我国生物技术产业蒸蒸日上[N];中国医药报;2005年
2 ;赵新先被拘真相调查[N];中国经营报;2006年
3 长江证券 孙五一;复星实业 欲作行业龙头[N];证券时报;2001年
4 新美;高剂量依坦西普改善银屑病疗效[N];中国医药报;2005年
5 长江证券 孙五一;复星实业 基因产业的龙头[N];江苏经济报;2001年
6 大鹏证券综合研究所 孙亮;复星实业欲成生物医药产业龙头[N];证券时报;2000年
7 北京大学第三医院风湿免疫科主任医师 刘湘源;风湿病治疗 生物制剂登场[N];健康报;2007年
8 ;上海赛达推出一类新药注射用重组改构人肿瘤坏死因子[N];中国高新技术产业导报;2003年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978