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菠萝组织与细胞培养及其诱导产酶研究

何铁剑  
【摘要】:本文研究了影响菠萝愈伤组织的诱导和生长的各种因素;菠萝细胞悬浮培养过程中培养基的成分及其它外部条件对细胞生长的影响;固体和液体培养过程中菠萝蛋白酶的积累和影响因素;诱导菠萝试管苗的条件等。研究得到如下结果: 1.用于诱导菠萝愈伤组织的材料以菠萝冠芽茎尖的效果最好。 2.诱导菠萝愈伤组织的培养基以MS培养基的效果较好。优选出适合菠萝细胞悬浮培养的MST培养基,其组成如下:NH_4NO_3 2500mg/L,KNO_3 1900mg/L,CaCl2·2H_2O 350mg/L,MgS04·7H_2O500mg/L,KH_2PO_4 270mg/L,蔗糖55g/L,KT 1mg/L,2,4-D 2mg/L,其它微量成分同MS培养基。 3.生长素或细胞分裂素都能诱导菠萝细胞分裂,但只有二者同时使用,才能诱导出愈伤组织。诱导愈伤组织的激素配比以2,4-D,2mg/L,KT 1mg/L的效果较好。 4.适量光照有利于愈伤组织的诱导和生长。 5.菠萝愈伤组织诱导和细胞悬浮培养的温度以28±℃最好,低于25℃,细胞生长缓慢。 6.菠萝愈伤组织的诱导需要良好的通气性,在用铝箔封口的三角瓶中,不能诱导出愈伤组织。 7.菠萝外植体在适宜的培养环境中培养,6~7天可见明显的细胞为裂,并慢慢形成浅黄色的块状或晶粒状的愈伤组织,13~20天增殖最快。培养28天,细胞鲜重增加7.5倍。 8.菠萝细胞悬浮培养细胞生长的动力学方程为G=2.23T~(0.76)。 9.菠萝外植体诱导的愈伤组织也含有菠萝蛋白酶。在细胞生长


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