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鸭坦布苏病毒、鸭源大肠杆菌和鸭疫里默氏杆菌三联苗的研制

刘晓文  
【摘要】:鸭坦布苏病毒、鸭源大肠杆菌和鸭疫里默氏杆菌三种都是近年来在我国养鸭业中广泛流行的病原菌,它们与各种病菌在临床上常以混合感染的形式出现,给养鸭业的经济造成了严重的损失。为了预防鸭坦布苏病毒病、大肠杆菌病和鸭疫,此次研究首次利用实验室所保存的鸭坦布苏病毒GDNS2010.1株、一株经鉴定血清型为O1的鸭源大肠杆菌和一株经鉴定血清型为Ⅱ型的鸭疫里默氏杆菌,作为抗原研制了鸭坦布苏病毒、鸭源大肠杆菌和鸭疫里默氏杆菌的三联灭活疫苗。具体研究内容如下:1鸭坦布苏病毒GDNS2010.1株、鸭源大肠杆菌O1株和鸭疫里默氏杆菌Ⅱ型的鉴定分析鸭坦布苏病毒GDNS2010.1株经鸭胚传代稳定后作为抗原,病毒尿囊液按照Reed-Muench法测得病毒为102.68 ELD50/0.2m L。鸭源大肠杆菌经麦康凯琼脂平板培养、革兰氏染色、生化试验、16sr RNA测序及血清型试验等方法鉴定为O1株。测得该菌株最小致死量(MLD)为0.2m L 1×107 CFU/m L。通过测定大肠杆菌在TSB生长曲线可知,当培养10h,活菌数达到最大浓度为1.1×1010CFU/m L,OD600为0.115。鸭疫里默氏杆菌经TSA血清平板培养、革兰氏染色、生化试验、16sr RNA测序、鸭疫里默氏杆菌Ⅱ型检测引物测序和血清型试验鉴等方法定为鸭疫里默氏杆菌Ⅱ型。测得该菌株最小致死量(MLD)为0.5m L×107 CFU/m L通过测定鸭疫里默氏杆菌在TSB生长曲线可知,当培养18h,活菌数达到最大浓度为9.8×1010CFU/m L,OD600为0.115。2鸭坦布苏病毒、鸭源大肠杆菌和鸭疫里默氏杆菌Ⅱ型三联苗的研制与免疫保护鸭坦布苏病毒、鸭源大肠杆菌分别经0.2%甲醛24h灭活,和鸭疫里默氏杆菌经0.4%甲醛24h灭活,以1:1:1的比例混匀作为水相,然后与油相以2:3的比例乳化成三联油苗。油苗经过物理性状检测和无菌检验后,进行了安全性试验和免疫试验,结果证实疫苗对试验动物安全可靠,对麻鸭具有一定的保护作用。本研究还对该三联灭活油苗的免疫程序进行探索,将麻鸭分成一免、二免、三免,三组,分别在不同时期对鸭子进行免疫和攻毒,并采血,运用中和抗体方法和ELISA方法检测鸭坦布苏病毒抗体水平、用微量凝集试验方法测鸭大肠杆菌抗体水平和鸭疫里默氏杆菌抗体水平。检测显示:鸭坦布苏病毒中和抗体效价在二免21天产生高峰为1:70.79,在三免14天后产生最高的抗体中和效价为1:77.62,抗体中和效价之后开始下降。麻鸭免疫坦布苏病毒在一免二免中各时期的血清ELSA检测均呈现阴性,在三免21d时为阳性,且可持续。麻鸭免疫后鸭大肠杆菌一免后30天的时候产生较高抗体平均效价6.76 log2。麻鸭在一免后21天进行第二次免疫,抗体在免疫后14天达到抗体水平高峰为8.33log2之后可以维持较高的抗体水平。鸭疫里默氏杆菌在二免30天后抗体平均效价达到最高峰为9.00 log2,三免麻鸭在21天后到达抗体平均效价最高水平9.00 log2,之后可以维持较高的抗体水平。攻毒试验结果显示:三免麻鸭可以对鸭大肠杆菌和鸭疫里默氏杆菌产生100%的保护效果。对三免麻鸭进行鸭坦布苏病毒攻毒,产蛋率有小幅下降,在一周内恢复到攻毒前水平。


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