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甜菜夜蛾NPV在昆虫细胞的增殖及生物学特性研究

吴福泉  
【摘要】:利用甜菜夜蛾(Spodoptera exigua)幼虫虫体继代的一株野生型甜菜夜蛾核型多角体病毒(Spodoptera exigua nucleopolyhedrovirus—SeNPV)感染人工饲料无菌饲育的甜菜夜蛾3龄幼虫,3日后发现幼虫染病死亡,镜检病虫尸体发现典型的病毒多角体。取染病幼虫的体液经过滤后感染甜菜夜蛾细胞株Se301,72 h发现大部分细胞核内形成病毒多角体,说明该病毒对Se301细胞具有强烈的感染性。 利用细胞培养技术,把含有野生型SeNPV粒子的培养液感染Se301细胞,通过空斑培养进行分离纯化,结果获得15个克隆株,分别把这些克隆株命名为SeNPV G1—SeNPV G15。分别对15个克隆株以及日本滋贺县分离的SeNPV1(S1)进行增殖培养,然后抽提病毒DNA,经EcoRI、Pst I、Xho I三种限制性内切酶进行酶切电泳分析,从15个克隆株中发现了三类DNA酶切图谱不同的变异株,和S1的酶切图谱也有差异。分别把这三类变异株命名为SeNPV G1、SeNPV G3、SeNPV G4。推定其DNA分子量,G1为130.67kb,G3为118.6kb,G4为129.3kb,S1为119.03kb。这些变异株的DNA图谱与美国及中国等报道的DNA图谱均有差异。认为野生型病毒具有自发突变的能力,进一步证明了同种野生型病毒DNA可能是由多种不同株型组成的混合群体。 检测三个变异株G1、G3、G4和日本株S1感染Se301及另外6株非寄主昆虫细胞的增殖情况,结果发现:4个株系对Se301细胞均有强烈的感染性,能在细胞中形成大量芽生型病毒(BV)和多角体,但变异株间的感染性有差异,BV的形成量是G3S1G4G1。4个株系均能感染草地贪夜蛾细胞株Sf9及桑斑灯蛾细胞株SpIm1229,并能形成病毒多角体;能在Sf9细胞中形成BV,但多角体的形成量及在Sf9细胞中BV的


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