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抗肿瘤活性海洋放线菌的分离筛选及其16S rDNA多样性分析

闫莉萍  
【摘要】: 先后从文昌红树林、儋州港以及洋浦港采集样品,采用苯酚、SDS、加热三种样品预处理法和添加重铬酸钾的选择培养法,并选用多种培养基对这些样品进行了具有抗肿瘤活性海洋放线菌的分离筛选。共分离到168株放线菌,其中23株具有较强的抗肿瘤活性。这168株放线菌中有164株是来自文昌红树林样品,从而表明具有特殊生态系统的红树林是分离筛选放线菌的良好资源。对所用到的预处理、重铬酸钾选择法以及各种培养基进行比较评价,表明SDS预处理和添加重铬酸钾的选择性培养方法能够有效地抑制细菌,从而有利于放线菌的筛选,且均可筛选得到多株具有较强抗肿瘤活性的放线菌,而苯酚预处理在抑制细菌的同时,也抑制了放线菌。相比较而言,添加重铬酸钾的选择性培养方法对于广泛的放线菌筛选更可行,并且由于其可以同时抑制真菌,因此可以有助于降低成本。YE培养基分离到的放线菌无论在总数还是有活性菌数上都明显优于其它三种培养基。 对本室先后分离到的30株具有较强抗肿瘤活性(ID_(50)≥200)的海洋放线菌进行基因多样性分析。16S ARDRA表明这30株菌株之间存在较大的基因多样性,共有17种不同的RFLP类型。来自不同采样点的菌株间有较大的基因差异性。对于同一采样点,不同预处理,不同培养基分离筛选到的活性放线菌间有较大的相似性,表明这几种预处理和培养基具有相似的选择特异性。 对三株有较强活性的菌株050642、060386和060524进行了16S rDNA序列分析,初步确定这三株菌都属链霉菌属,其中菌株050642与其亲缘关系最近菌株的相似性仅为95%,极有可能是链霉菌属的一个新种。


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