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红树林生态环境抗肿瘤活性放线菌的筛选及太空诱变育种

朱九滨  
【摘要】:本研究包括三个方面:对实验室前期获得的抗肿瘤活性放线菌复筛;筛选“神州5号”飞船太空诱变后的正突变株;以及活性稳定菌株的发酵条件优化和产物的理化性质研究。 通过第07~12批海洋抗肿瘤活性放线菌的分离筛选,初筛得到了81株具有抗肿瘤活性的放线菌,经过复筛,从中得到了3株具有较强抗肿瘤活性的放线菌:095601、124382和124092。其中菌株095601和124382所产抗肿瘤活性物质都主要存在于菌体中,其活性ID_(50)=320,而菌株124092活性物质在发酵上清液和菌体中都大量存在,其活性ID_(50)=5120。这3株菌菌体中所产活性物质易溶于甲醇,均为极性较强的物质。这3株菌所产活性物质的热稳定性和酸碱稳定性均良好。 本实验室从文昌红树林植物土壤中分离到的放线菌050642、060524和060386为强抗肿瘤活性放线菌,通过搭载“神州五号”飞船,对其进行空间搭载诱变,对诱变后的菌株进行筛选,从050642的突变株中得到了3株具有强抗肿瘤活性的菌株:TK4207、TK4237和TK4242。从060524的突变株中筛选到1株活性提高的形态突变株TK2403。这4株的遗传稳定性良好。 菌株TK4242所产抗肿瘤活性物质主要存在于菌体中,该活性物质为强极性物质,易溶于甲醇。该菌株生长和产活都不需要NaCl的参与,它耐受的最高盐度为6%。接种量对该菌的生长和产活有很大影响,该菌株生长和产活都随接种量的增加而响应的增加。 菌株TK4242发酵条件优化为:麦芽浸提物20g,硝酸钾15g,酵母粉5g,蛋白胨2g,NaCl4g,CaCO_3 4g,50%陈海水1,000mL,pH 7.2~7.4,装液量为100mL/1,000mL三角瓶,发酵时间为6d。 菌株TK4242所产活性物质的酸碱稳定性良好,在100℃以下热稳定性良好,但灭菌温度下活性丧失。


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