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人三叶因子3基因的合成及转化番茄的研究

阮孟斌  
【摘要】:三叶因子3(trefoil factor 3, TFF3)属三叶肽家族,是近年来被人们注意到的对肠道黏膜具有重要保护和修复作用的新型生长因子类多肽物质,因其分子中含有一个特征性三叶结构而得名。它结构稳定,不被多种消化酶破坏,能抗酸、抗蛋白酶和抗热分解,在消化道内能保持结构及功能上的完整。 套叠PCR技术又称重叠区扩增基因拼接法(gene splicing by overlap extension, gene SOEing)是利用PCR技术在体外进行有效的基因重组和定点突变。根据hTFF3的全长合成了4个单链片段用于合成hTFF3基因,经两次连接反应后,测序结果表明获得了正确的hTFF3基因全长183bp的序列。 植物生物反应器具有能准确表达和正确组装重组蛋白、生产成本低、生产方式简单、可以稳定大量生产、安全等优点,因此利用植物生物反应器表达药用蛋白具有广阔的研究和应用前景。 本研究采用番茄作为生物反应器来表达重组hTFF3,构建了含组成型启动子CaMV35S的植物表达载体pBTF。利用农杆菌介导法,转化番茄叶盘,经卡那霉素(Kan)多重筛选,共获得8株抗性植株。PCR分析结果为阳性的植株有7株。对其进行的结果显示,hTFF3基因已经与CaMV35S、Npt Ⅱ一起整合到了番茄基因组中。对Southern blot分析阳性植株进行RT-PCR分析证明,hTFF3基因在启动子CaMV35S的作用下在叶片有转录水平的表达。 本研究利用植物生物反应器表达重组hTFF3,以期获得适用于口服的重组hTFF3蛋白,为胃肠疾病的治疗开辟一条新的途径。


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