收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

酶解金枪鱼头蛋白制备抗氧化活性肽的研究

柯虹乔  
【摘要】:金枪鱼是名贵海洋鱼类,大多作为罐头加工或制作生鱼片,加工过程中产生的下脚料鱼头、内脏,鱼骨和鱼皮等约占总重量的50%~70%。金枪鱼头蛋白含量丰富,营养价值高,是一种优质的蛋白源,是开发功能食品的优质原料。 本论文以大眼金枪鱼头作为原料,采用酶解法、比色法、超滤、凝胶层析、高效液相色谱等方法,研究了酶解工艺的主要参数、酶解物体外体内抗氧化活性、抗氧化肽的分离纯化等内容,取得的主要研究结果如下: 1以干基计,大眼金枪鱼头蛋白质含量为63.33%,粗脂肪含量为16.72%,是一种高蛋白、高脂肪且氨基酸组成合理的优质蛋白资源。采用木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、Alcalase 2.4L、Typsin和Pepsin五种常用蛋白酶分别酶解金枪鱼头,以酶解产物对羟基自由基的清除活性为指标,得到Alcalase 2.4L酶解产物的活性最高,在酶解6h时清除率最大为59.44%;在单因素试验结果基础上,根据Box-Behnken的实验设计原理,设计三因素三水平的中心组合实验,考察温度、加酶量和酶解时间对羟基自由基清除率的影响,优化酶解条件为:酶解时间340min、温度54℃、加酶量为0.38%和自然pH,得到酶解产物的羟基自由基清除率为63.67%。 2采用多种抗氧化体系评价了优化酶解条件下制备的酶解物抗氧化活性。酶解物的还原力随蛋白浓度的增加而增加,在2.5mg/mL-12.5mg/mL浓度范围内,二者呈良好的线性关系(R2=0.9997);酶解物对超氧阴离子有较高清除能力,在浓度为5mg/mL时,清除率可达84.72%,IC50值为1.20 mg/mL;酶解物对DPPH自由基的清除率随蛋白浓度增加而增加,在浓度为2mg/mL时,清除率可达57.80%,IC50值为1.34 mg/mL;在磷脂卵黄体系中,酶解物能有效抑制金属离子诱导的脂质过氧化反应,其抗脂质过氧化能力略低于对照GSH,在5mg/mL时,酶解物对脂质过氧化的抑制率为51.21%,IC50值为4.98mg/mL;在热诱导大豆油的氧化体系中,不同浓度的酶解物对大豆油氧化抑制作用有显著性差异(p0.05), 0.1%酶解物和0.01%BHT的抑制脂质过氧化能力相当(p0.05)。高校液相色谱分析酶解物的分子量分布,结果表明酶解物主要由分子量3KDa以下的肽组成,比例为59.66%,其中有将近40%的低聚肽。 3采用截留分子量为8KDa、5KDa、3KDa和1KDa的超滤膜对金枪鱼头蛋白酶解物进行初步分离,得到五个超滤组分,对各组分清除羟基自由基能力进行测定,活性最高的为组分Ⅴ(1K),其对·OH的IC50值为1.38mg/ml;活性最低的为组分Ⅰ(8K),IC50值为3.15 mg/ml。对组分Ⅴ的其他抗氧化活性研究表明:组分Ⅴ的还原力随着添加量增加而增加,略低于酶解物;对超氧阴离子、DPPH自由基有较好的清除能力,IC50分别为0.73 mg/ml和0.93mg/ml;对卵黄磷脂氧化和大豆油的热诱导氧化都有显著的抑制作用,0.1%的组分Ⅴ和0.01%的BHT效果相当,能有效延缓油脂的氧化。 4采用Sephadex G-25葡聚糖凝胶对组分Ⅴ进行层析分离,组分Ⅴ被分成四个峰,峰Ⅰ分子量分布为1611Da~711Da;峰Ⅱ的分子量介于267Da~82Da之间,峰Ⅲ为游离氨基酸,峰Ⅳ可能是一些杂质产生的吸收。与酶解物和组分Ⅴ相比,峰Ⅰ和峰Ⅱ的对·OH清除活性有显著提高,IC50值分别为0.929 mg/ml和0.527 mg/ml,峰Ⅲ的羟基自由基清除活性较低,IC50值为1.65mg/ml。分析峰Ⅰ和峰Ⅱ的氨基酸组成表明,峰Ⅰ中87.12%的氨基酸都是以肽的形式存在的,其中Glu、Gly、Ala、Leu和Lys含量高;峰Ⅱ中Tyr、Phe、Leu和Met含量较高,推测可能与其抗氧化活性有关。 5通过动物实验考察了组分Ⅴ对D-半乳糖损伤小鼠的抗氧化活性。结果表明:与模型组比较,组分Ⅴ能改善D-半乳糖损伤小鼠的精神状态,对小鼠的体重无显著影响;低剂量组能提高小鼠的胸腺指数(p0.05),对小鼠的肝脏和脾脏指数无显著影响,显著升高D-半乳糖损伤小鼠肝脏中SOD活性(p0.05);高剂量组和低剂量组均显著升高D-半乳糖损伤小鼠血清和肝脏的GSH-Px活性(p0.05);高剂量组、低剂量组血清中MDA含量显著降低。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 海春旭;赵永同;龚书明;;硒与镉对大鼠肝脏抗氧化功能拮抗作用的研究[J];解放军预防医学杂志;1986年03期
2 相有章,杨晓霞,边建朝,王林;高锌摄入对机体代谢的影响[J];卫生研究;2004年06期
3 佟恒敏,卢彤岩,徐连伟;达氟沙星对史氏鲟血浆主要生化指标及抗氧化功能的影响[J];毒理学杂志;2005年S1期
4 胡春生,胡怡秀,胡余明,刘秀英,聂焱,周月婵,易传祝;北京蜂胶对老龄小鼠抗氧化功能影响的实验研究[J];实用预防医学;2005年05期
5 朱慧娟;赵岩;李世芬;王玉翠;;大豆提取物抗氧化作用研究[J];江苏卫生保健;2007年01期
6 华洋林;唐健;郭晓蕾;赵谋明;;维康素片剂抗氧化作用研究[J];食品科技;2008年07期
7 冯涛;庄海宁;;黄酮类化合物结构特征与抗氧化性关系研究进展[J];粮食与油脂;2008年10期
8 陈东方;王海玉;张聪恪;李立;刘翠娥;;天然虾青素软胶囊对人体抗氧化功能试验研究[J];现代预防医学;2011年04期
9 顾有方,毛鑫智,沈永林,J.Gonzalez-Gallego;实验感染肝片吸虫大鼠组织抗氧化功能的动态变化[J];热带医学杂志;2002年01期
10 刘传蛟,张旭,叶平,刘源,刘永平,王学松,边建朝;地方性氟中毒患者内外环境硒水平与机体抗氧化功能的测定[J];预防医学文献信息;2003年03期
11 肖白曼;王海霞;王吉刚;张剑锋;万丽葵;潘洪志;;番茄红素对前胃癌小鼠抗氧化功能的影响[J];中国公共卫生管理;2009年05期
12 龚晨睿;宋毅;刘晓燕;李骏;程茅伟;刘爽;卢笑丛;;人口服大豆异黄酮软胶囊抗氧化功能及安全性研究[J];公共卫生与预防医学;2010年02期
13 袁缨,黄艳玲,石磊;饲料硒、锗对肉仔鸡体内抗氧化功能的影响[J];营养学报;2004年01期
14 陈玉霞;郭长江;杨继军;韦京豫;吴健全;高蔚娜;;不同抗氧化活性蔬菜汁对大鼠抗氧化功能的影响[J];中国预防医学杂志;2010年07期
15 李培兵;金宏;王永辉;刘佃辛;南文考;;瘦素对创伤大鼠抗氧化功能的影响[J];解放军预防医学杂志;2010年05期
16 颜学先;王鼎年;倪银星;;硒与肿瘤Ⅱ—不同剂量硒对肝癌实体瘤小鼠抗氧化功能的影响[J];微量元素与健康研究;1988年04期
17 耿华田;;番茄红素与人体健康[J];化学教育;2006年10期
18 刘睿;龚晨睿;何兴旺;;大豆磷脂和V_E抗氧化、调节血脂功能的研究[J];中国油脂;2006年10期
19 赵京杨;邓昌彦;熊远著;;超营养剂量酵母硒对荷瘤小鼠抗氧化和免疫机能的影响[J];营养学报;2007年01期
20 邹翔;季宇彬;武晓丹;万梅绪;王志举;;西兰花中葡萄糖异硫氰酸盐对S_(180)小鼠抗氧化功能的影响[J];中国天然药物;2007年02期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 刘静;刘李超;宋杨;;多氯联苯醌介导氧化应激及抗氧化防御的研究[A];中国活性氧生物学效应学术会议论文集(第一册)[C];2011年
2 张艺;李忠;;苜蓿叶蛋白抗氧化功能的实验研究[A];首届中国西部营养与健康、亚健康学术会议论文集[C];2005年
3 陈琦;孙云;邓杨梅;张洪泉;;毛花黄芪总甙对小鼠免疫和抗氧化功能的影响[A];第七届中国抗炎免疫药理学术会议论文摘要集[C];2000年
4 李庆章;崔英俊;;滑菇多糖对衰老模型鼠不同时期抗氧化功能的影响[A];动物生理生化学分会第八次学术会议暨全国反刍动物营养生理生化第三次学术研讨会论文摘要汇编[C];2004年
5 张旭晖;都海明;朱秋凤;王恬;;α-生育酚琥珀酸酯对肉鸡抗氧化功能与肌肉品质的影响[A];中国畜牧兽医学会2009学术年会论文集(下册)[C];2009年
6 孙云;陈琦;龚跃新;张洪泉;;世博三七口服液对小鼠免疫和抗氧化功能的影响[A];第七届中国抗炎免疫药理学术会议论文摘要集[C];2000年
7 宣大蔚;;低磷奶牛红细胞抗氧化功能的研究[A];西部大开发 科教先行与可持续发展——中国科协2000年学术年会文集[C];2000年
8 郑伟;喻红;周赤燕;李小明;曹佳;杜芬;;对氧磷酯酶-1活性在高甘油三酯血症中的变化[A];第四届全国血脂分析与临床学术研讨会暨第九届全国脂蛋白学术会议论文汇编[C];2008年
9 崔恒敏;龚涛;柏才敏;陈涛;彭西;;高氟对雏鸡肝脏抗氧化功能和超微结构的影响[A];中国畜牧兽医学会2010年学术年会——第二届中国兽医临床大会论文集(下册)[C];2010年
10 王蓓;马海乐;;马铃薯渣蛋白抗氧化肽酶法制备技术研究[A];中国机械工程学会包装与食品工程分会2010年学术年会论文集[C];2010年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 林金莺;火麻仁蛋白水解及其抗氧化肽的研究[D];华南理工大学;2010年
2 唐博謇;糖基化对糖尿病合并冠状动脉粥样硬化性心脏病患者高密度脂蛋白胆固醇功能影响的研究[D];中国协和医科大学;2008年
3 杨桂芹;鹿胎制剂对老年大鼠的保健功能及其作用机理的研究[D];东北林业大学;2005年
4 刘宁;抗氧化纤维素酯的制备及其性能研究[D];东北林业大学;2009年
5 唐晓珍;彩粒小麦营养加工品质与色素研究[D];山东农业大学;2008年
6 汪学荣;猪血多肽铁螯合盐的制备技术及性质研究[D];西南大学;2008年
7 顾有方;实验感染肝片吸虫后机体抗氧化功能变化及其机制研究[D];南京农业大学;2000年
8 李艳飞;雏鸡脑软化症的分子免疫机理[D];东北农业大学;2002年
9 李国祥;含-OH、-SH、-NH及C=C化合物抗氧化与促氧化性能的研究[D];吉林大学;2010年
10 贾韶千;银杏抗氧化肽的制备、结构鉴定及活性研究[D];南京林业大学;2011年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 柯虹乔;酶解金枪鱼头蛋白制备抗氧化活性肽的研究[D];广东海洋大学;2011年
2 王迪;南瓜籽芽蛋白抗氧化肽的酶解条件优化及体外活性的研究[D];黑龙江八一农垦大学;2011年
3 彭地纬;米渣抗氧化肽的制备及特性研究[D];南昌大学;2010年
4 綦蕾;红松松仁抗氧化肽与抗肿瘤肽的制备及功能鉴定[D];哈尔滨工业大学;2010年
5 武萌萌;螺旋藻抗氧化多肽的制备及活性研究[D];北京林业大学;2010年
6 黄芳芳;间歇性低温刺激对肉鸡生产性能、抗氧化功能和组织结构的影响[D];东北农业大学;2012年
7 姚翔;紫菜可控酶解产抗氧化活性肽的研究[D];江南大学;2012年
8 欧晓峰;大麦虫抗氧化肽的分离纯化及特性的研究[D];西北农林科技大学;2010年
9 张萍;酶解罗非鱼碎肉制备生化试剂蛋白胨的工艺研究[D];福建农林大学;2009年
10 李锐达;乳清抗氧化肽的制备及其生物活性研究[D];东北林业大学;2010年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 曾利明;中国基因治疗脑中风动物试验研究获得成功[N];中国高新技术产业导报;2002年
2 本报记者 聂翠蓉;扫描成像技术派上了新用场[N];科技日报;2005年
3 记者 翁淑贤;SARS基因疫苗完成动物试验[N];人民日报;2006年
4 本报记者 钟卫宁;科学诠释膳食误区和难题[N];北京日报;2008年
5 驻德国使馆经商处;欧盟市场明年门槛更高[N];国际商报;2002年
6 刘路;印要造“大众版”抗禽流感药,很廉价[N];新华每日电讯;2005年
7 本报记者 桑雪骐;巧克力和茶叶有抗氧化功能[N];中国消费者报;2004年
8 姜澎;“人工眼睛”今年用于人体试验[N];文汇报;2008年
9 记者 王俊鸣;多国科学家合作研制抗SARS新药获进展[N];科技日报;2005年
10 记者 钱铮;中枢神经机能修复动物试验获得成功[N];新华每日电讯;2006年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978