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渔用弧菌疫苗注射佐剂的筛选和口服微粒的研制

李中权  
【摘要】: 本文选用铝胶佐剂和白油佐剂为弧菌疫苗注射用佐剂,制备了两种佐剂苗和一种水剂苗腹腔注射免疫红笛鲷,用间接ELISA法测定血清抗体滴度,并对其免疫保护率进行了评价。结果表明,红笛鲷在免疫后都发生特异性免疫反应,所有免疫组与对照组间抗体效价都存在显著差异(P0.01),铝胶组提升抗体效价比较快下降也比较快,白油佐剂组抗体提升后能够维持相对较长的一段时间。56天后各组分别用溶藻弧菌和哈氏弧菌攻毒,白油佐剂组免疫保护率为85.4%和82.6%,铝胶佐剂组为47.9%和41.3%,而水剂组为16.7%和21.7%。 本文选用海藻酸钠作为口服投递载体,采用乳化复沉淀方法包裹哈维氏弧菌全菌制备成疫苗微球,并对微球的制备工艺进行了优化,结果表明:3%(m/v)海藻酸钠溶液,菌浓度4×109 CFU. mL-1,水油相比1:9(0.1%Span80乳化剂),转速2000 r/min为其最佳制备工艺,微球疫苗粒径为37.5±0.478μm,跨度0.46,微球包封率高达98.6%。微球在体外模拟胃液和肠液12h释放率分别为10.2%和9.3%,24h释放率分别为16.8%和13.2%。FITC标记的荧光微球示踪表明微球能通过消化道到达后肠,1-24h在后肠能够检测到荧光微球,并可以明显看到后肠对荧光微球的吸收。免疫组织化学结果显示后肠在灌胃1天后免疫组化能检测到棕黄色的阳性颗粒,只到第7天还能在后肠检测到。微球疫苗口服免疫红笛鲷后,用间接ELISA法测定血清、肠粘液和体表粘液抗体效价,结果表明,红笛鲷在免疫后都发生特异免疫反应,灌胃组和投喂组在第四周时血清抗体效价都达到峰值1:4096和1:2048;肠粘液抗体效价在第3周和第5周分别达到峰值1:1024和1:512;体表粘液抗体效价和对照组没有明显变化。免疫30天后用活菌攻毒,测定受免鱼的免疫保护率,口服微粒灌胃组和投喂组30天后的免疫保护率分别为63.1%和47.3%。综合以上结果表明海藻酸钠能作为弧菌口服疫苗的投递载体,微球疫苗具有较好的免疫效果。


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