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LADA与CTLA-4、VDR、MIC-A基因多态性的相关性研究

丁洪光  
【摘要】:【目的】 探讨细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4基因外显子1的49位点、维生素D受体基因BsmⅠ酶切位点、MHC相关基因A外显子5多态性与深圳市成人迟发性自身免疫性糖尿病的关系。 【方法】 糖尿病诊断和分型标准按1997年ADA标准。在深圳市第二人民医院门诊、综合科病房、内分泌科病房随机选取LADA患者及2型糖尿病,分为LADA组及2型糖尿病组,并随机从深圳市第二人民医院体检中心选取健康体检人员作为对照组。按标准确定LADA患者、2型糖尿病和对照人员。空腹血糖、餐后2h血糖、空腹胰岛素、CP及餐后2h胰岛素、CP水平测定分别由深圳市第二人民医院检验科和放免室完成用购自加拿大Beyondbio公司试剂盒测定LADA患者、2型糖尿病和对照人员GADAb、ICA。基因组DNA制备用购至美国OMEGA公司的试剂盒提取。查找Gene bank后设计引物序列,应用PCR方法扩增CTLA-4、VDR、MIC-A目的基因,然后用2%琼脂糖凝胶电泳,溴化乙锭染色,紫外灯下观察PCR扩增结果并拍照。用BbvI内切酶、Bsm I内切酶特异地结合于CTLA-4、VDR目的基因的DNA序列之内,并切割双链DNA,然后用2%琼脂糖凝胶电泳,溴化乙锭染色,紫外灯下观察酶切结果并拍照。MIC-A外显子5基因PCR产物加变性上样缓冲液,95℃变性,8% 变性聚丙烯酰胺凝胶电泳, 0.2%硝酸银染色,紫外灯下观察结果并拍照。 【结果】 成功的从血液中提取基因组DNA,扩增CTLA-4、VDR、MIC-A目的基因及用BbvI内切酶、Bsm I内切酶特异地酶切CTLA-4、VDR目的基因。MIC-A变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,硝酸银染色。LADA患者CTLA-4基因外显子1G49等位基因频率显著高于正常对照组(P0.01)和T2DM组(P0.01),主要表现为基因型GG显著高于正常对照组(P=1.3×10~(-2))和T2DM组(P=3.4×10~(-2) ),基因型AG也明显高于正常对照组(P0.01 )和T2DM组(P=3.3×10~(-2)),基因型AA显著降低正常对照组(P0.01 )和T2DM组(P0.01 )。T2DM患者VDR基因B等位基因频率明显高于正常对照组(P=2.7×10~(-2)),基因型Bb明显高于正常对照组(P=1.6×10~(-2) ),基因型bb明显低于正常对照组(P=1.6×10~(-2));LADA患者Bb基因型频率以及B等位基因频率与对照组比较差异无统计学意义(P0.05)。LADA患者A5.1等位基因频率显著高于正常对照组(P0.05);2型糖尿病MICA等位基因频率与正常组比较差异无统计学意义(P0.05)。 【结论】 CTLA-4基因A/G49多态性、MICA5.1等位基因与深圳市LADA易感性相关。VDR基因BsmⅠ位点多态性与LADA易感性可能无关,但与T2DM的易感性密切相关。


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