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串联质谱检测正常儿童干血滤纸片中游离肉碱和酰基肉碱含量

蔡燕娜  
【摘要】:目的 建立一种简便、快捷的检测干血滤纸片中肉碱类化合物的方法。通过对0~13岁正常儿童干血滤纸片中游离肉碱和酰基肉碱含量的检测,对我国南方地区儿童体内游离肉碱及酰基肉碱水平进行了统计分析,为脂肪酸代谢障碍性疾病和有机酸血症诊断提供参考范围。 方法 取直径5 mm的干血滤纸片,加入含有游离肉碱和酰基肉碱的同位素内标,用甲醇萃取,萃取物过滤后直接上机分析,采用ESI+-MS/MS进行检测,数据采集采用多反应监测模式(MRM)对13种肉碱类化合物进行了检测。以美国CDC提供的质控样品作方法学验证。应用该法对277例0~13岁正常儿童的外周血干血滤纸片酰基肉碱进行检测。分6个年龄段组1(新生儿组):年龄~28天,孕周≥37周;组2:年龄~6月;组3:年龄~12月;组4:年龄~3岁;组5:年龄~6岁;组6:年龄~13岁。应用SPSS 17.0分析软件对数据进行统计分析。 结果 本实验建立的方法重复性好,各物质在低、中、高三个浓度级别的批内变异系数和批间变异系数都小于15%。各物质实测浓度与加入浓度之间的相对偏差在0.1%-27.2%。线性范围满足临床检测需要。通过比较各个年龄段儿童干血滤纸片法酰基肉碱类化合物含量发现:1.3-羟基异戊酰肉碱(C5OH)随着年龄的增大,含量下降。2.~28天组(组1);辛酰肉碱(C8)较其它年龄组的低;乙酰肉碱(C2)、十二酰肉碱(C12)、十四酰肉碱(C14)较其它年龄组的高。3.~6月组(组2):游离肉碱(C0)比~28天组(组1)和其它较大年龄组高;乙酰肉碱(C2)比其他较大年龄组高。4.~12月(组3)乙酰肉碱(C2)比其他较大年龄组高。5.~6岁年龄(组5)十四酰肉碱(C14)比其它小年龄组的低。6.~13岁组(组6)癸酰肉碱(C10)比其它较小年龄组高。7.丙酰肉碱(C3)、丁酰肉碱(C4)、异戊酰肉碱(C5)、己酰肉碱(C6)这些中、短酰基肉碱受年龄因素影响不大。用本方法诊断脂肪酸β-氧化代谢障碍1例。 结论 同位素稀释-非衍生化串联质谱法对干血滤纸片中游离肉碱和酰基肉碱进行分析,能够达到满意的精确度和准确度,每个样品前处理加上机分析只需要3小时,是一项简便、快捷检测方法,适合应用于临床检测。本研究提供的我国南方地区0~13岁正常儿童干血滤纸片酰基肉碱含量参考值范围,可以为脂肪酸代谢障碍和有机酸血症疾病的诊断、鉴别诊断、治疗提供有意义的参考。


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