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脐血间充质干细胞联合细胞因子支持人脐血单个核细胞体外扩增的探讨

邓婷芬  
【摘要】: 脐血作为一种造血干细胞资源越来越受到广泛重视,但由于单份脐血中造血干细胞数量不足,不能满足大多数成人和高体重儿童造血干细胞移植重建造血及免疫功能的需要,故限制了其广泛应用。体外扩增虽然可以增加造血细胞数量,但可能导致造血干细胞分化并降低其归巢和长期造血重建能力,因此提高脐血造血干细胞体外扩增质量仍是脐血移植中亟待解决的问题。 间充质干细胞作为造血微环境主要细胞成分基质细胞的前体细胞,可以分泌与造血干细胞生长发育相关的黏附分子、细胞外基质和多种细胞因子,为造血干细胞体外扩增提供适宜的微环境。随着培养技术的提高,脐血间充质干细胞有着与其他来源的间充质干细胞所无法比拟的优势。本实验研究脐血间充质干细胞对人脐血单个核细胞体外扩增的支持作用。 目的探讨脐血来源间充质干细胞(UCB-MSCs)体外分离、培养和初步鉴定的方法,以及UCB-MSCs联合外源性细胞因子对人脐血单个核细胞(UCB-MNCs)体外扩增的支持作用和最佳收获时间,为配合造血干细胞移植的临床应用提供实验方法。 方法用羟乙基淀粉(HES)和人淋巴细胞分离液(Ficoll-Hypaque)以密度梯度离心法分离脐血单个核细胞,采用贴壁筛选法以MesencultTM专用培养基培养出脐血间充质干细胞,并通过流式细胞仪检测其细胞表面抗原。将新鲜脐血标本分离出的脐血单个核细胞接种于无血清培养体系(Stem spanTM)中培养18天,实验分三组,A组:为空白对照组(培养体系中无外源性细胞因子和UCB-MSCs滋养层);B组:为因子组(培养体系中有外源性细胞因子但无UCB-MSCs滋养层);C组:为实验组(培养体系中既有外源性细胞因子又有UCB-MSCs滋养层)。在第0、7、10、14及18天检测有核细胞总数(MNCs)、CD34+细胞数、CD133+细胞数、集落形成单位数(CFU)和细胞在周期(G2+M+S期)含量的变化。 结果①从脐血中分离、培养的出间充质干细胞,稳定表达CD29、CD105和CD44,不表达CD34和CD133。②在体外培养过程中,外源性细胞因子及UCB-MSCs均对脐血单个核细胞的扩增起支持作用,但以UCB-MSCs联合外源性细胞因子组效果最好,该组各项指标在同一时间点较其它两组高,有统计学意义(P﹤0.05),且维持造血至少达18天。③以UCB-MSCs联合外源性细胞因子对脐血单个核细胞扩增,第10天上述各项指标达到最高峰,有统计学意义(P﹤0.05)。 结论①采用密度梯度离心联合贴壁筛选法并通过流式细胞检测技术,可以成功地实现从脐血中分离、培养出间充质干细胞,并完成其细胞表型的初步鉴定。②UCB-MSCs联合外源性细胞因子可有效扩增脐血单个核细胞。③UCB-MSCs联合外源性细胞因子体外扩增脐血单个核细胞细胞收获的最佳时间为第10-14天。


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