淫羊藿苷对骨质疏松大鼠MSCs定向分化干预的实验研究

【摘要】：目的 从细胞形态学、标志物蛋白合成(钙结节、ALP、OC)的角度,分别观察不同浓度对对体外培养的骨质疏松Sprague Dawley大鼠MSCs成脂分化和成骨分化的影响,探讨淫羊藿苷治疗骨质疏松症的可能作用机制。 方法 1运用全骨髓贴壁法分离、纯化、培养Sprague Dawley大鼠MSCs。 2从细胞形态学特征、DAPI染色、EdU染色、细胞的生物学特性、细胞特异性表面抗原等角度进行鉴定MSCs。 3单纯运用10ng/ml、20ng/ml、40ng/ml的淫羊藿苷与空白组对照,观察MSCs成脂分化状况,通过细胞形态学观察、油红0染色,探讨淫羊藿苷体外对MSCs成脂分化的影响。 4单纯运用10ng/ml、20ng/ml、40ng/ml的淫羊藿苷与空白组对照,不加入成骨分化诱导剂,观察诱导MSCs成骨分化,通过检测Von Kossa钙结节染色、碱性磷酸酶(ALP)活性及量和骨钙素(OC)活性及量,探讨单纯淫羊藿苷体外对MSCs成骨分化的影响。 结果 1.采用全骨髓贴壁法可稳定获得均质性良好的大鼠MSCs。 2 DAPI染色、EdU染色检测大鼠MSCs表面标志,抗原CD133表达阳性,CD34表达阴性。 3 10ng/ml、20ng/ml的淫羊藿苷对大鼠MSCs促进细胞的增殖分化,无明显抑制作用,40ng/ml的淫羊藿苷对细胞的增殖分化有一定的抑制作用。 4淫羊藿苷能促进MSCs增殖与分化,10ng/ml、20ng/ml能抑制MSCs向脂肪细胞分化；40ng/ml有促进MSCs成脂分化的作用。 5淫羊藿苷能促进MSCs成骨诱导后细胞体外钙化,提高细胞内ALP活性,上调骨钙素基因的表达,促进钙结节形成。 结论 淫羊藿苷在不加入其它成骨、成脂肪诱导剂的条件下,仍可促进MSCs的骨向分化,抑制脂肪细胞分化,其中以10ng/ml的淫羊藿苷作用最为明显,这可能是淫羊藿苷治疗骨质疏松症的可能作用机制之一。