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补肾活血方修复在位内膜缺陷治疗子宫内膜异位症不孕的临床研究

田滢舟  
【摘要】:背景 子宫内膜异位症(简称内异症,EM)是妇科常见病,是引起育龄期妇女盆腔疼痛及不孕的原因之一。目前子宫内膜异位症的西医病因病机尚未明确。尽管腹腔镜检查是作为子宫内膜异位症的诊断金标准,但由于其有创性及昂贵的价格,医学界在寻找非创性的确诊方法。目前国内外常用的治疗方法有药物、手术和辅助生育治疗,然而还没有一种治疗方法能够彻底治愈内异症。中医学认为内异症不孕的病机是肾虚血瘀。许多临床及实验研究显示,补肾活血法能有效提高EM患者受孕率。目前对中药补肾活血法治疗EM不孕的作用机制研究已达分子水平,发现补肾活血中药能调节EM患者.的免疫、内分泌功能,修复在位内膜缺陷,提高子宫内膜的容受性等,以提高妊娠率。但对其明确的作用机理及作用靶点仍未有定论。 目的 本研究目的为从蛋白质组学技术为切入点,探讨补肾活血方在修复EM不孕患者在位内膜缺陷的可能机制,并探讨EM不孕的发病机制及药物干预靶点,为EM不孕患者提供规范化的中医诊疗方案,为中医补肾活血方在EM不孕治疗的临床应用及推广提供客观的科学依据,并为新药的进一步开发提供理论基础。 方法 本研究采用临床试验方式,入选病人均来自2010年5月-2011年3月广东省中医院妇科门诊及住院部的EM不孕及人工流产术后3-6个月复查的病人,运用中医补肾活血方对EM不孕患者干预3个月,获取治疗前后EM不孕患者分泌中期在位子宫内膜及人工流产术后3-6个月复查的育龄期妇女分泌中期子宫内膜,采用荧光差异凝胶电泳(2D-DIGE)标记、分离蛋白质,Decyder差异分析软件进行分析,识别正常对照组、EM不孕组、中药干预组的差异表达蛋白质,并应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF/TOF)得到相应差异蛋白的肽质量指纹图谱,然后搜索数据库鉴定部分差异蛋白质点。 结论 通过本研究我们得出以下4点结论: 1.建立了正常妇女与子宫内膜异位症不孕患者及其中药治疗前后在位子宫内膜蛋白质组的差异双向电泳图谱。 2.应用差异软件分析得到35个差异蛋白点,并进行质谱鉴定,结果鉴定出28种差异蛋白,提示可能EM不孕发生相关。其中预测中药治疗的蛋白质作用靶点23种。 3.对24种差异表达蛋白质进行了生物信息学分析,归纳中药补肾活血方修复在位内膜缺陷的可能机制主要分为以下五方面:①调控细胞内信号传导通路:膜连蛋白(annexin I),蛋白激酶抑制蛋白1γ(YWHAG),蛋白激酶抑制蛋白1α/β(YWHAB);②改变细胞骨架组成,增加细胞侵袭能力:胞质肌动蛋白2(ACTG1),波形蛋白(VIM),微管蛋白α4A链(TUBA4A),β-肌动蛋白样蛋白2(ACTBL2);③调节子宫内膜细胞分泌蛋白:载脂蛋白A-1;④降低内膜细胞凋亡敏感性,促进细胞过度增殖:抗增殖蛋白(PHB),蛋白激酶抑制蛋白1γ(YWHAG),蛋白激酶抑制蛋白lα/β(YWHAB),核内不均一核糖核蛋白A2/B1(hnRNPA2/Bl),核内不均一核糖核蛋白C1/C2(hnRNPC1/C2);⑤参与自由基生成和清除平衡的酶表达异常,促进炎症反应复合物的形成:膜连蛋白(annexin I),超氧化物歧化酶(SOD2), DJ-1蛋白(PARK7),谷胱甘肽S-转移酶(GSTP1)。中药补肾活血方修复在位内膜缺陷的可能作用靶点涉及以上四种机制的相关蛋白。预测出2个有直接相互作用的蛋白质-蛋白质复合物。 总之,本实验通过联合DIGE分离-MALDI TOF/TOF质谱鉴定-生物信息学分析等蛋白质组学技术系统,来寻找正常妇女与子宫内膜异位症不孕患者及其中药补肾活血方治疗前后在位子宫内膜差异蛋白质。这不仅为揭示疾病发生的分子基础提供了新的技术方法,而且也为深入研究子宫内膜异位症相关不孕的发病机制及其中药治疗靶点机制提供了新的信息和机遇。


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