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安络小皮伞镇痛有效部位的药效筛选研究

黄志宏  
【摘要】:安络小皮伞为我国传统的药用真菌,始载于《新华本草纲要》,性温,微苦,归肝经,具有消炎、止痛的功能。其别名鬼毛针、茶褐小皮伞、盾盖小皮散、树头发等,属于担子菌纲、伞菌目、白蘑科、小皮伞属食药用真菌。本文研究的安络小皮伞为白蘑科小皮伞属植物Marasmius androsaceus (L.ex Fr.) Fr.的菌丝体。 本课题主要对安络小皮伞的相关文献,系统预实验,有效部位的筛选,总生物碱的提取纯化工艺及其质量标准进行研究。 文献研究:通过从安络小皮伞生物学特性、人工培养、药用价值、化学成分、药理活性研究、应用研究和研究前景等方面对安络小皮伞进行综述。同时对生物碱类化合物的研究概况包括概述、提取纯化方法、药理活性研究及应用等方面进行了总结,为进一步设计和实施实验方案提供理论依据。 系统预实验:通过系统预试验对安络小皮伞基本化学成分初步探讨,结果发现安络小皮伞中含有氨基酸、多糖、生物碱、皂苷、酚类等成分。结合本课题对安络小皮伞药理药效研究结果分析,本文的研究内容主要针对生物碱化合物进行。 有效部位筛选:采用热板和扭体法镇痛实验对安络小皮伞不同极性溶剂提取部位进行药效筛选,结果提示安络小皮伞中总生物碱部位具有明显的速效镇痛药效作用,这解决了临床上对安络小皮伞镇痛有效部位说法不一的问题,为安络小皮伞的进一步镇痛药效机理研究提供一定的理论基础。 有效部位的定量分析:本试验同时在文献报道的基础上,采用高效液相色谱法以皮伞碱为指标,对安络小皮伞生物碱镇痛有效部位进行定量分析,以便初步确立安络小皮伞镇痛有效部位的质量标准,从而为下一步对有效部位的作用机制考察提供实验依据。 总生物碱提取工艺:对乙醇浓度、提取温度、提取时间、溶媒用量、提取次数进行单因素考察,确定单因素水平。选择因素和水平采用L9(34)正交设计,考察提取时间、溶媒用量、提取次数、提取温度四个因素对提取的影响,确定安络小皮伞最佳的提取条件:10倍量80%乙醇,提取温度为80℃,提取3次,每次1.5h。 总生物碱的纯化工艺:考察大孔树脂的静态吸附性能考察,并考察了上柱液浓度、上样流速、泄漏曲线、洗脱溶剂、洗脱用量等因素对总生物碱富集的影响,确定最佳的富集工艺并进行工艺验证。大孔树脂最佳工艺参数为:为径高比1:6,上样溶液浓度0.4(生药)g/mL,吸附流速2 BV/h和最佳吸附量139.76 mg(总黄酮)/g(干树脂);最佳解吸条件为80%乙醇洗脱,洗脱流速4 BV/h和溶剂用量3 BV。大孔树脂柱95%乙醇洗脱液总固物中总生物碱的纯度可达到61.31%,精制度可达到3.19。


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