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益气、活血、化痰法及其不同组合治疗方案对COPD大鼠干预作用研究

单丽囡  
【摘要】:研究目的: 本课题旨在从细胞学、分子生物学和病理学三方面观察益气法、活血法、化痰法及其不同组合治疗方案对COPD大鼠气道炎症和气道重塑的影响和干预作用,从而对比和评价各不同治疗方法的疗效,并初步探讨其可能的作用机理,为中医药治疗COPD提供有效可靠的实验理论依据。 研究方法: 雄性SPF级SD大鼠90只,根据体重,随机分成9组(n=9)。同时,采用香烟熏结合气管内滴注脂多糖的方法建立COPD大鼠模型。 具体实验分组及用药如下: ①益气法组:给予益气组中药汤剂灌胃 ②活血法组:给予活血组中药汤剂灌胃 ③化痰法组:给予化痰组中药汤剂灌胃 ④益气活血法组:给予益气活血组中药汤剂灌胃 ⑤益气化痰法组:给予益气化痰组中药汤剂灌胃 ⑥活血化痰法组:给予活血化痰组中药汤剂灌胃 ⑦益气活血化痰法组:给予益气活血化痰组中药汤剂灌胃 ⑧模型组:给予生理盐水灌胃 ⑨空白组:给予生理盐水灌胃 给药时间及次数:各组从造模后第四天开始起给药,每日一次,直至造模结束第5天,用药共30天。 给药结束后,取材。采用细胞计数和HE染色法测量不同组别之间BALF中白细胞数量以及中性粒细胞、巨噬细胞和淋巴细胞的百分比,同时应用ELISA方法测定BALF中细胞因子IL-8和TNF-a的含量;免疫组化方法测量肺组织u-PA、TGF-p1和Elastin蛋白表达;显微镜下观测肺组织结构变化,并结合图像分析仪测量支气管总管壁和平滑肌厚度的改变。 研究结果: 1.各组BALF炎性细胞和细胞因子的变化 各组白细胞计数,巨噬细胞、中性粒细胞和淋巴细胞百分比,细胞因子IL-8和TNF-a的含量相比较,结果显示:白细胞计数,巨噬细胞、中性粒细胞百分比,细胞因子IL-8和TNF-a含量存在统计学意义(F=121.04, P=0.0000.05; F=64.97, P=0.0000.05; F=77.83, P=0.0000.05; F=23.4, P=0.0000.05; F=17.2, P=0.0000.05),淋巴细胞不存在统计学意义(F=0.74,P=0.6530.05)。各组之间白细胞计数、巨噬细胞、中性粒细胞百分比,细胞因子IL-8和TNF-α含量两两比较结果显示:模型组与空白组、益气活血化痰组、活血化痰组、益气活血组、益气化痰组和活血组比较;空白组同益气活血化痰组、活血化痰组、益气活血组、益气化痰组、化痰组、活血组及益气组相比较;益气活血化痰组同益气组、化痰组、活血组及益气化痰组相比较;益气活血组、活血化痰组同益气组、化痰组、活血组相比较;益气化痰组、活血组同益气组和化痰组相比较,白细胞计数,巨噬细胞百分比和中性粒细胞百分比,以及细胞因子IL-8和TNF-α含量,有明显差异,具有统计学意义(P0.05);但是益气活血化痰组、活血化痰组及益气活血组相比较,益气化痰组和活血组相比较,模型组、益气组及化痰组相比较,白细胞计数、巨噬细胞百分比和中性粒细胞百分比,细胞因子IL-8和TNF-α含量无明显差异(P0.05)。 2.各组肺组织病理结构改变和支气管总管壁及平滑肌厚度的变化 HE染色观察各组形态学变化:正常对照组气道壁薄,气道平滑肌薄;气管粘膜上皮排列规整,无脱落、粘膜上皮纤毛完整,排列整齐、管壁平滑、官腔无狭窄;未见杯状细胞增生及鳞状上皮化生;肺泡形态正常,间隔完整;未见炎症细胞。模型组显示:支气管黏膜上皮纤毛粘连、倒伏,部分气道有脱落;上皮细胞变性、坏死;出现鳞状上皮化生;杯状细胞数量增加;气道粘膜下腺体肥大增生,出现浆液腺泡粘液腺化生,部分支气管黏膜及腺体出现萎缩;小气道管腔狭窄;支气管壁充血水肿,有淋巴细胞和浆细胞浸润,并有管壁淋巴小结形成;肺泡扩张,出现间隔变窄破裂;气道壁增厚,气道平滑肌的厚度和正常组比较增厚明显。除益气组和化痰组外,其余各治疗组与模型组相比较,肺组织结构较好,炎症浸润较轻,气道壁增厚、气道平滑肌厚度减轻。且改善程度同模型组相比较由低到高分别为:活血组、益气化痰组、益气活血组、活血化痰组、益气活血化痰组。 图像分析结果显示:各组支气管总管壁厚度和平滑肌厚度,结果显示都存在统计学意义(F=133.6,P=0.0000.05;F=65.6,P=0.0000.05)。各组之间支气管总管壁厚度和平滑肌厚度两两比较结果显示:模型组、益气组和化痰组同空白组、益气活血化痰组、活血化痰组、益气活血组、益气化痰组和活血组比较;益气活血化痰组、活血化痰组、益气活血组、益气化痰组及活血组同空白组相比较;活血组同和益气活血组、活血化痰组及益气化痰活血组相比较;益气化痰组同益气化痰活血组相比较,前者支气管总管壁厚度和平滑肌厚度增厚,差异有显著性,具有统计学意义(P0.05);但是益气活血化痰组、活血化痰组及益气活血组相比较,益气化痰组和活血组相比较,模型组、益气组及化痰组相比较,支气管总管壁厚度和平滑肌厚度无明显差异(P0.05)。 3.各组肺组织u-PA、TGF-p1和Elastin表达的变化 采用Kruskal Wallis Test统计方法分析各组肺组织u-PA、TGF-β1和Elastin蛋白表达的变化,结果显示:各组肺组织u-PA、TGF-p1和Elastin蛋白表达,有明显差异,存在统计学意义(P=0.0000.05)。各组之间肺组织u-PA、TGD-β1和Elastin蛋白表达两两比较结果显示:模型组、益气组及化痰组与正常对照组、益气活血化痰组、活血化痰组、益气活血组、益气化痰组及活血组相比较;益气化痰组及活血组同空白组相比较;活血组同和益气活血组、活血化痰组及益气化痰活血组相比较;益气化痰组同益气化痰活血组相比较,u-PA和TGF-β1蛋白表达增强,Elastin蛋白表达降低,,差异有显著性,具有统计学意义(P0.05);但是益气活血化痰组、活血化痰组及益气活血组相比较;益气化痰组和活血组相比较;模型组、益气组及化痰组相比较,u-PA、 TGF-β1和Elastin蛋白表达无明显差异(P0.05)。 研究结论: 1.具有益气活血化痰、活血化痰、益气活血、益气化痰及活血功效的中药可以抑制COPD大鼠BALF中性粒细胞聚集和巨噬细胞的增多和活化,减少细胞因子IL-8和TNF-α的分泌,达到缓解炎症反应的疗效。 2.具有益气活血化痰、活血化痰、益气活血、益气化痰及活血功效的中药可以抑制COPD大鼠肺组织u-PA和TGF-β1表达的同时,增强Elastin表达。 3.具有益气活血化痰、活血化痰、益气活血、益气化痰及活血功效的中药可以改善COPD大鼠支气管总管壁和平滑肌的厚度。 4.具有益气活血化痰、活血化痰、益气活血、益气化痰及活血功效的中药可能是通过调节COPD大鼠肺组织u-PA、TGF-β1和Elastin的表达,达到干预和延缓COPD气道重塑的进程。 5.以益气、活血、化痰为主的三种治疗方法中,活血法更具疗效。 6.益气活血化痰组、活血化痰组和益气活血组的功效优于益气化痰组和活血组。


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