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海南裸花紫珠高效液相指纹图谱研究

马思遥  
【摘要】:目的: 为了实现裸花紫珠药材的质量控制,保证该药材及相关制剂的临床应用安全有效,为其进一步开发及生产的可持续性打下坚实的基础,本论文开展了与裸花紫珠药材质量标准相关的:包括文献研究、裸花紫珠药材高效液相色谱法(HPLC)指纹图谱等研究。从而提高裸花紫珠药材质量评价标准,为建立裸花紫珠药材GAP种植基地提供科学的数据支撑,同我国现代中药材质量标准要求与时俱进。 方法: 课题研究采用具有快速可靠且技术成熟等特点的HPLC法建立裸花紫珠药材指纹图谱。对指纹图谱色谱条件,包括流动相系统、检测波长、梯度洗脱程序及检测时间等;供试品溶液制备方法包括提取方法、提取溶剂种类、提取溶剂用量、提取时间等进行了全方位的考察,以图谱基线、色谱峰的分离度及色谱峰数量等为指标对其进行评价。结合相关文献、保留时间、峰的纯度及紫外吸收光谱图等资料初步确定成分峰的方法,对裸花紫珠指纹图谱中的几个色谱峰进行指认。 采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版》(研究版)软件对采集的海南省共10批裸花紫珠色谱图进行了分析评价,得出指纹图谱共有模式;将11批白沙县不同采收期样品(2010年的3批为野生)之间以及与海南省共有模式图谱进行相似度评价;将海南省另3个地区的指纹图谱共有模式与海南省共有模式比较,观察不同地区与所建立的指纹图谱有无差别;对两种不同气候采收的样品进行分析研究,观察其差异。 用已确定的HPLC指纹图谱条件对广东紫珠、大叶紫珠、杜虹花、枇杷叶紫珠等另外4种常用紫珠属植物进行测定,验证裸花紫珠药材HPLC指纹图谱的专属性。 结果: 试验结果建立的裸花紫珠HPLC指纹图谱条件确定为:色谱柱:Agilent TC-C18(250mm×4.6mm,5μm);流动相系统:乙腈:0.30%乙酸;流速:1.0mL/min;梯度洗脱;柱温:30℃;进样量:20gL;波长:254nm。供试品处理方法:裸花紫珠药材粉末约2.0g,50%甲醇50mL,80℃水浴回流提取30min,过0.45gm膜,取续滤液,即得。方法学考察结果:稳定性、精密度、重复性的相对保留时间和相对峰面积RSD%都在3%之下,相似度计算结果都在0.99以上,完全符合中药指纹图谱的技术要求。 在裸花紫珠药材HPLC指纹图谱中,确立了19个共有峰,建立了海南省裸花紫珠药材指纹图谱共有模式,样品之间以及样品与对照指纹图谱的相似度都很高。相似度计算和系统聚类分析结果表明:白沙县不同采收期的裸花紫珠样品、野生样品与栽培品存在差异;可优先选择临高县、海口市及五指山市建立GAP种植基地;不同气候样品存在差异,且个别样品差异较大,药材的采收期可定在炎热季节(3月~8月)。 研究可以初步确定11号峰为毛蕊花糖苷(36.17min)所在位置,16号峰为木犀草素(64.42min),18号峰为5,4'-二羟基-3,7,3'-三甲氧基黄酮(92.37min)。 通过与广东紫珠、大叶紫珠、杜虹花、枇杷叶紫珠4种常用紫珠属品种图谱对比,体现裸花紫珠药材在该条件下具有很好的专属性,可达到对裸花紫珠药材真伪鉴别的目的。 结论: 本课题首次建立了海南裸花紫珠药材HPLC指纹图谱方法,运用该方法可对药材的整体质量进行控制,并可将裸花紫珠与市场上常用的紫珠属品种区分开,达到体现裸花紫珠药材品种专属性的目的。对不同产地、不同采收期的裸花紫珠药材图谱进行相似度及系统聚类分析评价,可了解其内在差异,结合原有的含量测定等结果,为药材的种植及生产原料选择提供科学依据。


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