黄芪多糖对SKOV3细胞化疗增敏作用的自噬调控机制研究

【摘要】：目的:本研究采用黄芪多糖联合顺铂的方式处理人卵巢癌SKOV3细胞,探讨黄芪多糖通过调控细胞自噬增加卵巢癌SKOV3细胞对顺铂化疗敏感的可能作用机制,为黄芪多糖通过发挥其抗肿瘤效应并对顺铂起到辅助化疗增敏作用而应用于临床提供理论依据。方法:1.MTT法检测黄芪多糖、顺铂及黄芪多糖联合顺铂对卵巢癌SKOV3细胞增殖抑制的影响;2.流式细胞术分别检测黄芪多糖、顺铂及黄芪多糖联合顺铂对卵巢癌SKOV3细胞的凋亡的影响;3.流式细胞术分别检测黄芪多糖、顺铂及黄芪多糖联合顺铂对卵巢癌SKOV3细胞的周期分布的影响;4.RT-PCR法检测黄芪多糖、顺铂及黄芪多糖联合顺铂对卵巢癌SKOV3细胞自噬相关蛋白Beclin1,LC3Ⅱ,p62的mRNA表达水平的影响;5.WB法检测黄芪多糖、顺铂及黄芪多糖联合顺铂对卵巢癌SKOV3细胞自噬相关蛋白Beclin1,LC3Ⅱ,p62的表达水平的影响。结果:1.MTT结果示:与对照组相比,黄芪多糖、顺铂及黄芪多糖联合顺铂均可明显抑制卵巢癌SKOV3细胞增殖(P0.05),联合给药组的抑制作用更加显著(P0.01);与黄芪多糖、顺铂单独给药组相比,黄芪多糖联合顺铂给药对卵巢癌SKOV3细胞增殖抑制率明显提高,差异有统计学意义(P0.05)。2.流式细胞术凋亡结果显示:与对照组相比,黄芪多糖、顺铂及黄芪多糖联合顺铂对卵巢癌SKOV3细胞的凋亡率均明显增加(P0.05),其中联合给药组的凋亡率显著增加(P0.01);与黄芪多糖、顺铂单独给药组相比,黄芪多糖联合顺铂给药对卵巢癌SKOV3细胞的凋亡作用更加明显,差异有统计学意义(P0.05)。3.流式细胞术周期分布结果显示:与对照组相比,黄芪多糖、顺铂及黄芪多糖联合顺铂对卵巢癌SKOV3细胞均发生了明显的周期阻滞,以G0/G1期的阻滞最为明显,差异有统计学意义(P0.05),其中联合给药组G0/G1期的阻滞显著(P0.01);与黄芪多糖、顺铂单独给药组相比,黄芪多糖联合顺铂给药组对卵巢癌SKOV3细胞的周期阻滞作用更加明显,差异有统计学意义(P0.05)。4.RT-PCR结果显示:与对照组相比,黄芪多糖、顺铂及黄芪多糖联合顺铂使卵巢癌SKOV3细胞的Beclin1、LC3Ⅱ基因表达上调,P62基因表达下调,差异有统计学意义(P0.05),联合给药组的上述变化更加显著(P0.01),与黄芪多糖、顺铂单独给药组相比,黄芪多糖联合顺铂给药组对卵巢癌SKOV3细胞上述基因的调控作用非常明显,差异有统计学意义(P0.05)。5.WB结果显示:与对照组相比,黄芪多糖、顺铂及黄芪多糖联合顺铂使卵巢癌SKOV3细胞的Beclin1、LC3Ⅱ蛋白表达上调,P62蛋白的表达下调,差异有统计学意义(P0.05),联合给药组的上述变化更加显著(P0.01);与黄芪多糖、顺铂单独给药组相比,黄芪多糖联合顺铂给药对卵巢癌SKOV3细胞上述蛋白的调控作用也非常明显,差异有统计学意义(P0.05)。结论:黄芪多糖可以通过调节细胞自噬来增加卵巢癌SKOV3细胞对顺铂的化疗敏感性,这一作用的可能机制是通过上调自噬相关蛋白Beclin1,LC3Ⅱ,下调自噬标记蛋白P62,增强卵巢癌SKOV3细胞自噬活性,从而增加卵巢癌SKOV3细胞对顺铂化疗的敏感性。