四逆汤有效部位的药代动力学——药效动力学研究

【摘要】： 四逆汤始载于《伤寒论》，由附子、干姜、炙甘草组成，方中附 子“味辛大热，纯阳有毒，其性走而不守”，干姜“大热无毒，守而不 走”，二阳相合，一走一守，佐以甘草，具有回阳救逆之功效，临床上 常用于阳虚欲脱、脉微欲绝等症。 目的：对四逆汤有效部位进行药代动力学（Pharmacokinetics，PK） -药效动力学（Pharmacodynamics，PD）研究，阐明四逆汤回阳救逆的 物质基础，揭示其“走而不守，守而不走”的配伍规律。 方法：（1）四逆汤的制备：分别提取附子、干姜、炙甘草，合并。 （2）四逆汤的精制：应用D_(101)大孔吸附树脂精制。（3）四逆汤精制物 的药学评价：用薄层层析法（TLC）考察附子中的生物碱类成分，甘草 中的甘草酸、甘草黄酮类成分及干姜中的一些特征成分；用高效液相 色谱法（HPLC）考察乌头类生物碱（包括双酯型生物碱及其水解产物） 的指纹图谱特征并测定其含量。（4）四逆汤精制物的药效学评价：选 择离体蛙心的心肌收缩力、心输出量、心率等强心指标及促进血管扩 张，改善休克状态的一氧化氮（NO）指标。（5）血药浓度HPLC测定方 法的建立。（6）PK-PD研究：取狗肌内注射四逆汤精制物，分别于给药 前、给药后不同时段股动脉取血，取同一时相的血清测定乌头类生物 碱含量及NO含量；所得实验数据用MCPKP自动化药物动力学程序软件 处理，计算药动学参数；进行相关性研究。 结果：（1）四逆汤精制的条件：四逆汤上柱药液的浓度为0.5g/ml， 乙醇洗脱浓度为70％，流速为1ml/min。在此条件下，乌头类生物碱的 解吸率为83.57％，干膏量为总量的5.23％。（2）药学研究结果表明： 与四逆汤比较，四逆汤精制物TLC图谱中斑点个数、大小及颜色均基 本相同，保留了附子中的生物碱类成分，甘草中的甘草酸及甘草黄酮 类成分，干姜中的一些特征成分。四逆汤精制物HPLC图谱中乌头类生 物碱及其水解产物峰的峰数、峰位、峰形均与四逆汤基本一致。乌头 类生物碱的含量为0.0243mg/ml。（3）药效学实验证明：四逆汤精制物 广州中医药大学硕士学位论文 能增加离体蛙心心肌收缩力及心输出量，减慢心率；显著升高间羟胺 处理小鼠血清中NO的含量，与四逆汤相比无显著性差异。（4）血药浓 度HPLC测定方法的研究表明：血清中乌头碱对照品的线性方程为： Y＝42667．11982X－2817．133，相关系数 r＝0．9995，线性范围为：1—20 u g／ml。高、中、低三个浓度的乌头碱对照品液天内回收率分别为 93．60％、94．56％、94．76％，RSD分别为3．20％、2．62％、2．44％；天间回 收率分别为 93．30％、93．99％、93．09％，RSD分别为 2．60％、1．54％、2．11％。 门）PK干D研究结果表明：乌头类生物碱血药浓度及NO净增率在狗体 内的动态变化均符合开放一房室模型。血药浓度法所测参数为： K。二4．94052bYS－l，K二0．32852 hTS－l，TI／ZK。二0．144llhYSI TI／ZK二2·11256hi’S，Tp二0．59622hi’S，CB．：二2．21856 119加l AUC二8．2332Sg．hgs／l，V＝0．029961／kg CI二0．009861／kg．hgs；药理效 应 法 所 钡 参 数 为：K。＝4．16196hSS－‘，K二0．43185hrs－‘ T；／、。。二0·16942hrs‘，T；；。。二1．60573hrs，Tp＝0．61320hrs。在 0一6hr之间 乌头类生物碱血药浓度与NO净增率存在良好的相关性。相关方程为： Y＝0．4478X－0．1123，r＝0．9939o 结论：乌头类生物碱的体内动态变化在一定时间范围内可以反映四 逆汤升高血清NO含量的药效程度，血药浓度法与药理效应法在一定程 度上存在良好的相关性，乌头类生物碱是四逆汤回阳救逆的物质基础； 药动学参数表明四逆汤有效部位起效快，维持时间长，与四逆汤“走 而不守，守而不走”的配伍规律相吻合。