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健骨二仙丸防治骨质疏松机理及一氧化氮调控机制研究

李昂  
【摘要】: “龟鹿二仙膏”为传统古方,出自《医便》,方用鹿胶、龟胶、人参、枸杞 四味,为阴阳气血交补之剂,可填阴补精,益气壮阳。根据导师多年相关学术临 床经验,在“龟鹿二仙膏”的基础上,以益气补肾为基本法则,研制了防治骨质 疏松药物“健骨二仙丸”胶囊。观察健骨二仙丸胶囊对骨质疏松症动物模型的治 疗效果和探讨其作用机制。 建立骨质疏松小鼠模型应用于中医药研究,用健骨二仙丸治疗卵巢切除小鼠 有明显的效果,骨密度升高,骨生物力学显著改善,血钙维持在正常水平,ALP 水平显著降低,在抑制骨吸收作用的同时并不引起明显子宫增生,在某些生物力 学指标方面优于后17β雌二醇组及Raloxifene组,弹性载荷、弹性桡度、最大载 荷等方面表现突出。明显抑制OVX小鼠体内骨吸收活动,而又同时具有 Raloxifene不刺激子宫增生等优点,这方面是17β雌二醇所不具有的。 给予健骨二仙丸治疗的卵巢切除大鼠骨密度上升,骨强度和骨韧性保持基本 较为完好,健骨二仙丸治疗骨质疏松症不仅在于其增加了骨钙含量,提高了骨量, 更在于其促进骨组织Ⅰ型胶原的合成与分泌,为羟基磷灰石提供了赖以沉积的支 架,并改善了骨组织的显微结构,从而提高了骨质量,使骨的生物力学性能增强, 骨折危险性降低。原位杂交、免疫组化实验显示健骨二仙丸可抑制OVX大鼠升 高的iNOS表达,对iNOS mRNA表达有明显的下调作用,提示健骨二仙丸可从 mRNA转录水平调控NOS的活性,从而减轻功能亢进的OC性骨吸收,而对骨 组织正常生理活动中的eNOS合成,有适度促进作用。健骨二仙丸还可促进骨髓 基质细胞向OB转化,可增强OB活动及功能,对OVX大鼠显著降低骨吸收的 同时,不抑制骨形成而起到调控或者促进作用,有利于骨组织的重建及骨量的恢 复,从而重建骨形成-吸收新平衡偶联。 健骨二仙丸对体外培养的人类成骨细胞株TE-85生长增殖有明显促进作用, 增加ALP、AGP的合成并释放,对细胞因子或AG作用下功能活动较低下的细 胞活性也可得到一定恢复。并在国内骨科率先应用FITC-Annexin V/PI双标记 广州中医药大学附间深训市中医赐 琴臼 阂土生导师 而劲夫 —— 技术,通过流式细胞仪检测 TE 85细胞生存及凋亡情况,并结合 Bcl.2、Bax免 疫组化染色、iNOS含量测定等实验探讨健骨二仙丸防治骨质疏松及其调控一氧 化氮的可能机制。实验结果显示健骨二仙丸作用可总结为:促进生理情况下eNOS 表达,抑制病理状态下的iNOS产生;在转录,翻译水平对施加有利影响,可使 TE 85细胞Bcl毛表达增加而Bax产生下降,从而使成骨细胞在更长时间内保持 旺盛的功能状态。可降低凋亡细胞比例,减少骨细胞非正常生理状态下的凋亡, 延长其功能活动时间,从而促进骨重建。 以益气补肾为基本法则的健骨二仙丸不同于单纯激素替代疗法,作用不是单 一的,如调控细胞间信息传递途径、促进骨髓基质细胞向成骨细胞分化,增强成 骨细胞功能活动,延长其生存时间等,因而是多方面的多位点的集合作用,这种 药理作用是调动作用,调节作用,非激素替代作用,对骨质疏松的防治提供了有 效合理的途径。


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