收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

骨炎定对体外培养软骨细胞的影响

杨运东  
【摘要】: 骨性关节炎是中老年人的常见疾患,主要病理特征是关节软骨的退 变。关节软骨退变的原因尽管是多方面的,但软骨细胞的结构破坏和功 能丧失在其中起着至关重要的作用。采取有效方法保护软骨细胞的结构、 调节软骨细胞的功能是防止软骨退变的关键措施,是治疗骨性关节炎的 正确途径。陈基长教授研制的中药骨炎定(GUYANDING,GYD)能减 轻骨性关节炎的临床症状,改善关节功能。为了深入探讨其作用机理, 本实验采用软骨细胞培养技术观察其对软骨细胞代谢的影响。 实验一:关节软骨细胞的分离和培养 采用胶原酶Ⅱ分段酶消化法从三月龄大耳白兔的关节软骨中分离出 软骨细胞并进行原代和传代培养。每日在倒置显微镜下观察细胞形态及 其生长情况,并用甲苯胺蓝异染色法进行细胞表型鉴定。结果表明,软 骨细胞形成单层的时间原代培养1周左右,传代培养约4-5天,细胞以 圆形或上皮样细胞形态为主。甲苯胺蓝染色证实,细胞可合成蛋白多糖, 异染反应主要集中在细胞集落样生长区,异染程度以原代培养最为显 著。 实验二:骨炎定对培养兔软骨细胞增殖和蛋白质合成的影响 把传一代的软骨细胞接种于96孔培养板和24孔培养板中,培养24 小时后细胞贴壁进行分组试验。 1 MTT法测细胞增殖把96孔培养板中的32孔随机分为8组,每组4孔, 每孔培养体积0.1ml。A组(对照组)加用5%血清培养液;B-G组:分 别加用含有5%血清与1.25%、2.5%、5%、10%、20%、40%DMEM培 养液;AO组为空白调零组,未接种细胞,只加有含有5%血清的DMEM 广州中医药大学九八级骨科博士:杨运东 导师;陈基长 培养液。在培养48小时后用MIT ie检测细胞活性和增殖。结果GYD 组 5O、10o、20%骨炎定可促进软骨细胞增殖,与对照组相比,差别有 非常显著意义。 2考马斯亮蓝祛检测细胞总蛋白 24孔培养板随机分为六组,每组4孔,分别为:A组:空白对照组。 只加含有5%血清培养液;BS组分别加含有20%、10%、5%骨炎定、5% 防风、5%当归注射液的培养液,培养三天后用考马斯亮蓝法检测细胞总 蛋白。结果表明:5%、10%、20%可促进软骨细胞总蛋白合成,与对照 组相比差别有非常显著性意义。炉仍刀l) 实验三:骨炎定对培养软骨细胞NOS和SOD的影响 把原代培养的软骨细胞接种于24孔培养板中,细胞贴壁生长后随机 分为6组并更换相应的培养液。A组(空白对照组人更换DMEM培养 液;B组(实验对照组)更换含有 100U/rnllN’--的培养液滑卜骨*组: 分别更换含有100、5o、2。50、1.25O骨炎定培养液(含有100UhaltwF)。 焙养刀小时后,收集各孔.上清液,用比色法检测NOS、SOD %性。结 果表明,TN’-可使软骨细胞中的iNOS活性增加,5%骨炎定可显著提高 软骨细胞SOD %性,抑制i:NOS活性。 实验四。骨炎定对培养软骨细胞超微结构的影响 传代培养的软骨细胞接种于8个培养瓶中,每瓶中预先置有盖玻片 一块。培养24小时细胞贴壁后培养瓶随机分为两组,对照组:更换含有 生理盐水的培养液。骨炎定组:更换含有5%骨炎定培养液。培养5天后, 取出小盛片,2,5%戊二醛固定后行扫描电镜观察。收集培养瓶中的细胞, 2.5%戊H醛固定后行透射电镜观察。结果:5%骨炎定组软骨细胞表面的 3 骨炎定对体外培养软骨细胞的影响 纤细突起和皱稻较对照组多,细胞表面的囊泡数少,透射电镜观察软骨 细胞胞浆丰富,线粒体和粗面内质网发达。超微结构的变化说明中药骨 炎定对软骨细胞有保护作用。 结论:本实验充分说明中药骨炎定可促进软骨细胞的增殖和蛋白质合成, 保护软骨细胞兔受肿瘤坏死因子等细胞因子的损害,可提高自由基清除 水平,调节软骨细胞的合成代谢,从而有效地保护软骨细胞,达到防止 软骨退变的日的。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 黄际河;张亚峰;王贤波;秦泗通;陈蔚东;陈东阳;蒋青;;p38在大鼠骨性关节炎模型中的表达[J];江苏医药;2008年05期
2 赵湘洪,陈宝兴,丁继华;骨碎补对实验性骨性关节炎的治疗作用[J];中国中药杂志;1987年10期
3 黄冲;刘金钊;;褪黑素治疗骨性关节炎的研究进展[J];中国矫形外科杂志;2010年17期
4 程义权;郭振河;杨家辉;余伦红;;丹参对体外关节软骨细胞抗过氧化氢损伤实验研究[J];重庆医学;2008年10期
5 赵玉岩;郭磊;田蕾;高晓宇;刘魁;;骨性关节炎软骨细胞中胰岛素样生长因子Ⅱ表达的研究[J];中国老年学杂志;2009年02期
6 方锐;艾力江·阿斯拉;卢勇;孟庆才;张凯;卢艳丽;;兔骨性关节炎模型构建及早中晚期的特点[J];中国组织工程研究与临床康复;2010年07期
7 余丹丹,王和鸣;骨性关节炎实验研究进展[J];中医正骨;2000年12期
8 向川;杜靖远;翁习生;卫小春;;转化生长因子-β1基因和胰岛素样生长因子1基因联合转染治疗兔膝骨性关节炎的研究[J];中华实验外科杂志;2005年12期
9 周临东;刘恩;郭立玮;;伤科消炎膏对骨性关节炎软骨细胞影响的组织学观察[J];江苏中医药;2006年11期
10 程义权;郭振河;杨家辉;余伦红;;过氧化氢对体外关节软骨细胞损伤效应及丹参干预作用实验研究[J];西南国防医药;2008年02期
11 张楠;张柳;郑桓;赵小林;李硕;张胜强;刘志翔;;降钙素在体内和体外实验中对兔关节炎关节软骨的保护作用[J];中国矫形外科杂志;2008年01期
12 马柯;徐永明;浦少峰;周瑾;杜冬萍;;自体血清关节腔内注射对骨性关节炎软骨细胞凋亡的实验研究[J];中国疼痛医学杂志;2010年02期
13 李振华;赵文海;周秋丽;;鹿茸多肽对抗骨关节炎软骨细胞氧化损伤作用的实验研究[J];中国骨伤;2011年03期
14 潘海乐,王耶;IL-1与骨性关节炎研究新进展[J];中国老年学杂志;2002年01期
15 唐勇,姜杰,周永红,孙立,曹勇,陈基长;骨炎定对兔实验性膝骨关节炎关节软骨的组织病理学影响[J];四川中医;2004年01期
16 唐勇,姜杰,孟辉,周永红,孙立,陈基长;骨炎定对兔实验性膝骨关节炎关节软骨细胞中bcl-2mRNA表达的影响[J];山东中医杂志;2004年03期
17 唐勇,姜杰,周永红,孙立,曹勇,陈基长;骨炎定对兔实验性膝骨关节炎关节软骨中iNOS表达的影响[J];云南中医学院学报;2004年01期
18 黄枫,谢国平;补肾方含药血清对软骨细胞增殖的影响[J];广州中医药大学学报;2005年02期
19 黄正;傅文;冯伟;张凤华;朱雅萍;魏立;周琦;袁石福;黄好;杜宁;;循环静水压力对维持兔软骨细胞表型的影响[J];中国骨伤;2007年03期
20 韦家宁;戴七一;;骨性关节炎细胞凋亡的研究进展[J];浙江中医药大学学报;2009年03期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 冷薇;冯文周;邹学农;;骨性关节炎(OA)临床研究进展及药物治疗[A];2010年中国药学大会暨第十届中国药师周论文集[C];2010年
2 赵阳;柳子星;王颖;张惠珍;王树军;葛海良;;大鼠IL—10真核表达载体在软骨细胞中的瞬时表达[A];中国免疫学会第四届学术大会会议议程及论文摘要集[C];2002年
3 杨翔;刘日光;;双醋瑞因纳米材料对大鼠骨性关节炎中p38丝裂原活化蛋白激酶的影响[A];第六届西部骨科论坛暨贵州省骨科年会论文汇编[C];2010年
4 李振华;赵文海;冷向阳;闻辉;赵长伟;周秋丽;;鹿茸多肽对兔骨性关节炎软骨细胞增殖及凋亡调节作用[A];自主创新与持续增长第十一届中国科协年会论文集(3)[C];2009年
5 李振华;赵文海;冷向阳;闻辉;赵长伟;周秋丽;;鹿茸多肽对兔骨性关节炎软骨细胞增殖及凋亡调节作用[A];中医药中青年科技创新与成果展示论坛论文集[C];2009年
6 陈维毅;张全有;卫小春;王小虎;;正常及骨关节炎软骨细胞生物力学特性研究[A];第八届全国生物力学学术会议论文集[C];2006年
7 张继帅;郝振明;谭晓红;王友亮;毛春明;吕娅歆;程萱;杨晓;;软骨细胞特异性Smad4基因剔除导致小鼠长骨发育异常[A];中国的遗传学研究——中国遗传学会第七次代表大会暨学术讨论会论文摘要汇编[C];2003年
8 刘献祥;;毫米波抑制TNF-α诱导NF-κB信号转导通路的实验研究[A];2010中国医师协会中西医结合医师大会摘要集[C];2010年
9 任宏造;;软骨细胞的超生结构病理[A];第六次全国电子显微学会议论文摘要集[C];1990年
10 张亚;王晓东;尹航;张锡庆;董寅生;;兔骺板软骨细胞与多孔聚乳酸、多孔丝素材料的体外相容性[A];中华医学会第八次全国小儿外科学术会论文集[C];2010年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 杨运东;骨炎定对体外培养软骨细胞的影响[D];广州中医药大学;2001年
2 周琦石;骨炎定对一氧化氮抑制人类软骨细胞Ⅱ型胶原合成的影响[D];广州中医药大学;2006年
3 胡建华;骨性关节炎软骨细胞凋亡的研究[D];中国协和医科大学;1999年
4 曹燕明;外固定支架及骨炎定对骨性关节炎的实验研究[D];广州中医药大学;2002年
5 李元城;微流控芯片上胰岛素样生长因子-1(IGF-1)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对兔关节软骨细胞体外增殖的影响[D];大连医科大学;2010年
6 范李;辛伐他汀防治骨关节炎的实验研究[D];华中科技大学;2010年
7 孙宝宾;鼻中隔软骨细胞与神经肽关系的实验研究[D];复旦大学;2004年
8 杨朝晖;钠离子通道阻断剂利多卡因体内外干预关节软骨的生物学效应[D];山西医科大学;2011年
9 杜佳梅;以小耳残耳软骨细胞为种子细胞的组织工程软骨的实验研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2008年
10 李西海;透骨消痛胶囊含药血清对软骨细胞周期与凋亡影响的研究[D];福建中医药大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 袁海鹰;鹿茸多肽对兔骨性关节炎软骨细胞金属蛋白酶mRNA表达的影响[D];长春中医药大学;2007年
2 肖经难;六味地黄丸对兔膝关节骨性关节炎软骨细胞影响的实验研究[D];湖南中医学院;2002年
3 梁文清;复方六味地黄丸治疗骨性关节炎的实验研究[D];山东中医药大学;2005年
4 王振;塞来昔布、透明质酸及其复合制剂对兔骨关节炎软骨细胞作用的实验研究[D];苏州大学;2009年
5 程目强;鹿茸多肽治疗骨性关节炎的实验研究[D];长春中医药大学;2009年
6 王明波;体外冲击波对体外培养兔关节软骨细胞增殖及相关生长因子活性的影响[D];河北医科大学;2009年
7 庄园;丹参酮对膝骨性关节炎模型细胞活性及氧自由基代谢的影响[D];暨南大学;2007年
8 黄武君;大豆异黄酮对体外关节软骨细胞的影响[D];天津医科大学;2007年
9 李晓林;T140体外阻断SDF-1/CXCR4信号通路延缓人关节软骨退变的研究[D];昆明医学院;2011年
10 邱丽燕;人骨髓间充质干细胞的分离、培养及向软骨细胞方向的诱导[D];浙江大学;2003年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 保健时报特约记者 方序;体外“养”一块软骨补膝盖[N];保健时报;2011年
2 记者 邰举;韩用猪软骨细胞制成生物材料[N];科技日报;2008年
3 马晓华;骨性关节炎最终治疗:人工关节置换[N];第一财经日报;2008年
4 吴一福;西安交大:用人胎儿软骨细胞培养成功软骨组织工程种子细胞[N];中国医药报;2006年
5 陈如为;骨关节炎折磨千万人软骨细胞缺氧是元凶[N];医药经济报;2000年
6 良文;得了骨性关节炎怎么办[N];经济日报;2001年
7 本报实习记者 刘晨;患骨性关节炎怎样锻炼?[N];健康时报;2003年
8 本报记者 何佳颐;骨性关节炎能否不手术?[N];健康时报;2003年
9 主治医师 高洪生;骨性关节炎的正确治疗[N];家庭医生报;2003年
10 蔡铁勇 主任医师;骨性关节炎有哪些症状[N];上海中医药报;2004年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978