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先天感染华南鸭乙肝模型的建立并验证肝经引经药对3TC抗乙肝病毒疗效的影响

杨书兰  
【摘要】: 乙型肝炎以易于慢性化为其特征,部分慢性肝炎持续多 年,最终可发展为肝硬化及肝癌,目前尚无满意的治疗方法。 鸭乙型肝炎病毒与人类乙型肝炎病毒同属嗜肝DNA病毒 科,鸭乙肝模型近年来已成为筛选和评价抗-HBV药物的常 规模型。但在国内尚未发现简单、实用、可行的建立先天感 染鸭乙肝模型的方法,制约了抗乙肝药物的研究。 中西医结合治疗慢性乙肝,近几年已进行了多方面的探 索与研究,但多停留于中西药简单的合用阶段。 本课题应用PCR及Dot-blot两种方法筛选建立先天感 染鸭乙肝模型,从血清病毒学及病理学两方面对先天感染鸭 乙肝模型与一日龄雏鸭感染所致的后天感染模型进行了比 较,并利用先天感染鸭乙肝模型,研究了肝经引经药柴胡及 《伤寒论》少阳病主方小柴胡汤对拉米呋啶抗乙肝病毒作用 的影响,探索以中医理论指导中西医结合治疗慢性乙型肝炎 的方法。 结果证明PCR法与Dot-blot法比较,有简单、快捷、 敏感度高等优点,且可避免Dot-blot带来的放射性污染。但 是PCR法所需费用高,易因交叉污染而导致假阳性结果, 影响以后的实验。 已有的实验结果证明,先天感染鸭在两周内血清病毒 滴度极高,两周后即下降至一个较低水平,并持续两年左右。 我们的实验亦发现,相同剂量的药物,在雏鸭十七日龄时给 药有效,而于二日龄时给药则无效。 先、后天感染鸭乙肝模型的比较结果显示,先天感染模 型血清病毒滴度高,持续时间长。肝脏的病理改变亦有明显 不同:先天感染鸭肝的炎性改变(包括围管浸润、枯否细胞 增生、局灶性坏死)多集中于汇管区及中央静脉周围,肝细 广州中医药大学98纽博士论文 作者:杨书兰 广州中医荧大学热带医学研究所 胞的损害均较后天感染为重;而后天感染鸭肝多表现为广泛 星点样坏死,大部分血管均出现围管浸润,但细胞病变较轻, 在接种病毒后第28天左右,肝脏趋于正常。这一结果证明, 先天感染鸭乙肝模型的病理变化更接近慢性、兔疫耐受性乙 型肝炎病人的病理变化。 药物抗病毒实验的结果证明,拉米味吱在smglkgld剂 量时,于先天感染二日龄雏鸭给药无效,于十七日龄雏鸭给 药则有明显抑制血清病毒滴度的作用;柴胡不能降低血清病 毒滴度,亦未能明显延缓拉米吠睫停药后的反跳;小柴胡汤 能有效降低先天感染鸭的血清病毒滴度,亦有一定的延缓拉 米味咬停药后反跳的作用。肝脏病理检查结果证明,给予拉 米味陡后不会加重肝脏的炎性病变(与对照组相比p>o.05卜 细胞病变略有减轻:柴胡不能改善肝脏的病理改变(与对照 组相比p>o.05* 服用小柴胡汤后,鸭肝细胞出现严重的溶 解现象,炎症改变亦明显加重(与对照组相比p<o.01卜 由此 可见,拉米吱陡的抗病毒作用与机体的兔疫清除作用关系不 明显,而中药小柴胡汤则是通过免疫调节作用来清除病毒 的。柴胡合用拉米吠陡后,肝脏的炎性改变未见好转(与对 照组相比p>o.05卜 但细胞损伤明显减轻,基本趋于正常; 小柴胡汤合用拉米吠陡治疗过程中,肝脏病理改变亦明显好 转。而且柴胡及小柴胡汤与拉米吠唆合用后,鸭肝细胞中的 网状纤维亦较对照组及单用拉米吠陡组轻微减少。说明肝经 引经药柴胡或少阳病主方小柴胡汤与拉米吠陡合用,有可能 通过协同作用杀灭肝细胞内病毒而起到减少肝细胞损伤、控 制肝纤维化的作用。 多脏器病毒检测实验结果证明,乙肝病毒不仅存在于鸭 肝脏中,而且存在于脾、肺、肾、胰、生殖器、脑等多个脏 器中。这可能是乙肝病毒难于清除的原因之一。因此乙肝病 2 广州中医药大学98级博士论文 作者:杨书兰 广州中医茹大学热带医学研究所 人的治疗不能局限于某一脏器,而应从整体上、从脏器的相 互关系上、从免疫调节等各方面进行论治。


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