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系统性红斑狼疮中医辨证分型与HLA-DQ基因分型的相关性研究

查旭山  
【摘要】: 系统性红斑狼疮(SLE)是一种严重危害人类健康的自身免疫性疾病,其治疗至今仍是世界难题。结合中医药治疗SLE有一定的优势,它可明显减少激素样副作用,提高SLE患者的生存质量,而辨证施治是中医药治疗的一大特点,是中医药治疗的精华,“证”是遣方用药的依据,法随证立,方依法制,可见正确的辨证在SLE的中医治疗中有着十分重要的意义。但长期以来,由于历史的原因,SLE的证的分型比较混乱,没有统一的标准,这不仅造成中医对SLE认识上的混乱,还严重制约了中医治疗SLE的规范化、科学化研究。因此,我们通过回顾文献、专家调研、大样本资料的收集,运用流行病学/DHE/循证医学的科研方法,确定SLE的基本证型,使SLE证的研究标准化、规范化且符合实际。 SLE的发病原因目前尚未完全清楚,一般认为与遗传、感染、药物、日光、精神等因素有关,多见于女性。近年来的研究表明,遗传因素在SLE的发病中起决定性作用,SLE的免疫遗传学研究表明人白细胞抗原(HLA)、T细胞表面抗原受体(TCR)基因、免疫球蛋白基因等“自身免疫基因”可能在SLE的发病中具有至关重要的作用。HLA是迄今发现最具多态性的遗传系统,与SLE有关的主要是HLA-Ⅱ类基因,HLA-Ⅱ类基因座在HLA-D区,包括HLA-DQ、DR、DP三个亚区,其中某些HLA-DQ、DR位点间存在较强的“连锁不平衡”关系,近年来随着分子生物学技术的发展,进一步揭示了SLE与HLAⅡ类基因特别是DQ亚区的关系。已有学者提出“共有表位”假说,认为SLE中不同HLA-DQ等位基因所共有的多态性序列可能在导致某些自身抗体的产生中起重要作用。已有研究表明HLA-DO类基因多态性与SLE的种族易感性及临床特征有关。见于以上研究基础,我们试图就HLA-DQ类基因分型与SLE的中医辨证分型间的关系进行探讨,旨在揭示证的本质。若二者之间具有规律性的内在联系,则不仅为SLE的中医辨证提供了客观的实验室依据,从而指导辨证用药,而且对SLE及“证”的易感性研究,为将基因治疗引入到对证候的治疗中积累了数据,即若是基因的特殊表达与疾病的证相关,则可通过对易感基因的修饰达到对“证”的预防及治疗的目的。因此研究不同群体、不同证型SLE患者及正常人群HLA-Ⅱ类基因的多态性,对于分 离致病基因、从事基因治疗、探讨中华民族起源及中医现代化将具有重大的历史 意义。 目的:确定SLE的基本证型,使SLE证的研究标准化、科学化;寻找广东籍 SLE患者的易感基因,探讨SLE的发病原因;从基因水平寻找SLE中医辨证的客 观依据,从而指导中医辨证用药;认识llLA0Q基因与SLE中医证的易感性,为 寻找证的易感基因及为将基因治疗引入到SLE证的治疗中积累科学数据。 方法: 卜)SLE基本证型的确定 (1)整理总结文献,对 SLE辨证分型形成初步认识 (2)设立专家问卷,广泛收集全国各地SLE中医著名专家对SLE辨证分型 的认识和体会,初步制定出SLE的基本证型。 (3)设计临床资料表,收集大量的病历,病例均符合美国分湿学会制定的 诊断标准。对同一患病人群不同时点的证候特征进行前瞻性研究,分析疾病发 展过程中证候的形成、发展,同时对不同证型在患病人群中所占的比例进行研 究,对大样本资料加以综合分析,确定目前我国SLE患者的基本证型。运用SPSS 软件中分层聚类分析法确定各证型的辨证标准。 N)统计学处理:证型的确定研究中,计量资料选用t检验或方差分析, 计数资料用X‘检验;采用频数分布结合聚类分析(或因子分析)确定各证型宏 观判断指标。 (二)1B中医基本证型与各系统损害的关系 (1)收集各系统检查较齐全的 SLE患者 208例,其中男性 6例,女性 202 例;其中热毒炽盛型32例、肝肾阴虚型46例、脾肾阳虚型30例、阴虚内热型 62例、风湿热痹型胎例。患者均为本院或中山二院门诊或住院患者。 门)各证型间血常规、SR、肝功能OLT厂尿常规、肾功能Kr入 免疫八 项等进行比较研究,总结各证型与系统损害的关系。 门)统计学处理:SLE各证与各系统损害关系的研究中用SPSS软件进行数 据处理,其中计量资料选用t检验,计数资料用xZ检验。 (5庄LE中医基本证型与HLA刁Q基因分型的相关性研究 (1)研究对象:拟选广东籍(连续三代出生居住在广东)汉族SLE患者42 例,SLE患者均符合1992年美国风湿病协会修订的诊断标准,且辨证后确定其 中医证型属于基本证型之一。其中男2例,女40例,年龄9峭2岁,平均32.5 士 6.31岁,自愿做 HLA基因分型检测。选取连续三代均为广东籍无亲缘关系的 健康者110例作为对照组,其中男3例,女27例,年龄16-50岁,平均31.4土 8.24岁。 (2)样本来源及处理:以广东籍健康者及SLE患者全血为研究标本。入选者 均取外周静脉血 4-10ml,ACDB抗凝,离心(1500r/min)5。in后用毛细管吸取 白细胞层,加 20ml红细胞裂解液,洗3次备用。分离白细胞用改良的盐析法提 取基因组DNA,建立DNA资源库。 (3)DNA的提取用快速盐析法:参照Miller等的方法改进。上述备用白细 胞的一半加 lml白细胞核裂解液,80u


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