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金刚纂抗肝癌活性的实验研究

苏三棱  
【摘要】:1.目的:金刚纂是对癌症具有比较客观疗效的一味中药,本文拟以其提取液,来处理肝癌细胞株HepG-2,以初步探讨金刚纂体外抗肝癌的作用机制。 2.方法: 2.1细胞的培养:用0.06%胰蛋白酶将HepG-2细胞分散成单个细胞悬液,用含10%胎牛血清的DMEM培养液配成浓度为3×10~5个/ml的细胞悬液,按0.1ml/孔分种于96孔板,置37℃、饱和湿度、5%CO_2培养箱内培养。 2.2金刚纂提取物对HepG-2细胞的毒性作用实验:将金刚纂水提物原液作系列倍比稀释成以下八个浓度100、50、25、12.5、6.25、3.13、1.56、0.78g/L,将金刚纂醇提物原液作系列倍比稀释成以下七个浓度100、25、6.25、1.56、0.39、0.098、0.024g/L。用0.06%胰蛋白酶将HepG-2细胞分散成单个细胞悬液,用含10%胎牛血清的DMEM培养液配成浓度为3×10~5个/ml的细胞悬液,按0.1ml/孔分种于96孔板,置37℃、饱和湿度、5%CO_2培养箱内培养,培养24小时细胞贴壁,2d后换含药培养液0.1ml/孔,每个浓度2孔,并设不加药物的对照。置37℃、饱和湿度、5%CO_2培养箱内继续培养,12d后去掉上清,将所余细胞用MTT法测药物细胞毒性。 2.3金刚纂提取物对HepG-2细胞生长曲线的影响:取对数生长期细胞用10%胎牛血清的DMEM培养液配成细胞数为1×10~4/ml的单细胞悬液,在24孔培养板中接种细胞,每孔1ml。培养24小时细胞贴壁后,用完全培养基将金刚纂水提物稀释至浓度为60g/L和30g/L,将金刚纂醇提物稀释至浓度为9g/L和4.5g/L,对照组用2%DMEM取代金刚纂水提物及醇提物。37℃、5%CO_2、饱和湿度条件下于CO_2培养箱中培养。在培养后即刻及1、2、3、4、5、6、7天,各取样4孔,消化后各孔取40 μl,加0.4%台盼蓝染液10μl,置血球计数板计数拒染的活细胞数,并与培养时间作图。 2.4金刚纂提取物对HepG-2细胞AFP分泌的影响:将金刚纂水提物原液作系列倍比稀释成以下八个浓度60、30、15、7.5、3.751、1.875、0.938、0.469g/L。将金刚纂醇提物原液作系列倍比稀释成以下八个浓度9、4.5、2.25、1.125、0.563、0.281、0.141、0.070g/L。用0.06%胰蛋白酶将HepG-2细胞分散成单个细胞悬液,用含10%胎牛血清的DMEM培养液配成浓度为3×10~5个/ml的细胞悬液,按0.1ml/孔分种于96孔板,置37℃、饱和湿度、5%CO_2培养箱内培养,培养24小时细胞贴壁,2d后换含药培养液0.1ml/孔,每个浓度2孔,并设不加药物的对照。置37℃、饱和湿度、5%CO_2培养箱内继续培养;12d后收集上清,用人血清甲胎蛋白(AFP)酶联定量诊断试剂盒检测上清中AFP的分泌量。 2.5金刚纂水提物对HepG-2细胞ALT和LDH的影响:用0.06%胰蛋白酶将HepG-2


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