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葛根素对脑缺血再灌注损伤大鼠海马CA1区锥体细胞L-型钙通道的影响

唐瑜  
【摘要】:葛根素(Puerarin)是临床上常用的中药注射剂。作为改善心脑血管循环的药物,广泛运用于治疗心肌梗塞和缺血性中风性疾病。近年来,对其在脑缺血再灌注损伤中所起的保护作用研究较多,其防治缺血性脑病的机制可能与清除氧自由基、影响脑组织诱导型一氧化氮合酶、降低皮层钙凋磷酸酶和钙蛋白酶活性、诱导脑缺血再灌注后神经细胞HSP70合成增加等方面有关。现在众多的对葛根素拮抗钙通道的研究多是通过酶学或形态学、免疫组化等方法而获得的,本项研究运用膜片钳技术,旨在从离子通道角度来阐明葛根素防治缺血性脑病的机制。 一、葛根素对正常大鼠海马CA1区锥体细胞L-型Ca~(2+)通道的作用 目的:观察不同浓度葛根素对正常大鼠海马CA1区锥体细胞L-型Ca~(2+)离子通道的作用。 方法:采用酶加机械分离的方法,急性分离出成年大鼠海马CA1区锥体细胞后,将含有锥体细胞的细胞悬液滴加于盖玻片上,待贴壁后选取符合实验条件的细胞,运用膜片钳单通道技术记录同一钳制电压下离子通道活动情况。 结果:采用110mmol·L~(-1) Ba~(2+)作为载离子时,L-型Ca~(2+)通道电流幅度为1.5pA左右,电导大约为26pS。当葛根素为低浓度(1.2、2.4mmol·L~(-1))时,开放时间无明显变化(P0.05);浓度达到4.8、9.6mmol·L~(-1)时,L-型Ca~(2+)通道平均开放时间由对照组的12.332±0.567ms分别减少到7.963±0.166ms和4.523±0.128ms(P0.05);当浓度进一步增加到19.2mmol·L~(-1)时,通道平均开放时间降至3.274±0.217ms(P0.05)。葛根素浓度为1.2、2.4mmol·L~(-1)时,开放概率与对照组相比无明显差别(P0.05)。当浓度达到(4.8,9.6mmol·L~(-1))时,通道开放概率由对照组的0.0010400±0.0002408分别减小到0.0005620±0.0000259和0.0003460±0.0000321(P0.05),随着浓度的增加(19.2mmol·L~(-1)),开放概率降至0.0002520±0.0000295(P0.05)。 结论:高浓度葛根素可以抑制正常大鼠海马CA1区锥体细胞L-型Ca~(2+)离子通道,减少通道开放时间,降低通道开放概率,在一定范围(4.8,9.6,19.2mmol·L~(-1))成浓度依赖性。


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