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加味升降散对IB病毒学及ARDS免疫学影响的实验研究

李香兰  
【摘要】:一、研究目的 探索中药对SARS相关病毒学及免疫学的机理,以鸡传染性支气管炎模型进行SARS相关病毒学研究,以ARDS模型进行SARS相关免疫学研究。 1、探讨鸡传染性支气管炎病毒(IBV)的增毒传代及几种检测方法,在体内观察加味升降散的抗病毒作用。 2、体外细胞培养观察加味升降散的抗病毒、抑制病毒作用,以病毒蚀斑定量测定法揭示其可能的抗病毒机理。 3、建立小鼠ARDS模型及探讨加味升降散改善ARDS模型小鼠血气的作用。 4、探讨加味升降散对ARDS模型小鼠氧自由基及炎性介质的影响,并揭示其可能的抗氧化机理及细胞免疫调节机制。 5、探讨加味升降散对ARDS模型小鼠T淋巴细胞亚群的作用,并揭示其可能的免疫调节机理。 二、实验步骤 1、IBV的传代并检测 2、加味升降散对鸡传染性支气管炎体内模型的影响 3、IBV蚀斑减数实验 4、正常NIH小鼠动脉血气分析、肺系数及百草枯LD_(50)的测定 5、小鼠ARDS模型的建立、加味升降散的急性毒性实验及加昧升降散对ARDS模型小鼠血气的影响 6、加味升降散对MDA、SOD、NO的影响 7、加味升降散对IL-1β、IL-2、IL-6、IL-8及TNF-α的影响 8、加味升降散对小鼠T淋巴细胞亚群的影响 三、实验方法 1、按《动物病毒学》的方法接种传代IBV,NDV干扰法及侏儒胚实验均按《动物病毒学》的方法。RT-PCR检测方法:按RT-PCR试剂盒说明书操作,最终产物做琼脂糖凝胶电泳,电泳产物进行紫外检测并用mini-visionary~(TM)凝胶成像系统记录试验结果。 2、IBV尿囊液,冻溶后缓慢滴入雏鸡双鼻、双眼,然后随机分为正常组,模型组,阳性对照组,中药大、中、小剂量,攻毒后10小时予以药物治疗,中药大剂量组2:1、中剂量组1:1、小剂量组1:2浓缩,每只小鼠每天灌胃0.6ml,分两次灌胃。阳性药物组予更昔络韦10mg/kg,用蒸馏水配制后灌胃0.6ml/只,正常组及模型组灌等体积蒸馏水。共观察9天,期间主要观察雏鸡的症状、大小便、死亡等指标。


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