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木豆叶联合骨髓间充质干细胞治疗股骨头坏死的实验与相关临床研究

史达  
【摘要】: 股骨头坏死(osteonecrosis of the femoral head,ONFH)是临床常见的疑难病之一。该病主要发生在20~50岁的青壮年,平均年龄38岁,最终导致髋关节功能障碍,严重影响患者生活质量,造成沉重的社会经济负担。目前股骨头坏死的治疗方法很多,但由于缺乏大样本量可对比的成功病例的长期随访文献,以及各文献使用的评价标准、统计学方法和股骨头坏死分类等存在差异,因此到目前为止尚没有一种适应证合理、疗效最好的治疗方法。通络生骨胶囊是袁浩教授结合多年的临床实践筛选出来的治疗股骨头坏死的有效药物,木豆叶为其主要成分。自1982年以来单独或配合手术应用,已经治愈大批股骨头坏死患者,前期的大量实验研究表明该药具有确切的疗效。为进一步探索提高治疗股骨头坏死疗效的方法,采用动物实验模型观察木豆叶联合骨髓间充质干细胞治疗股骨头坏死的作用以及木豆叶联合骨髓间充质干细胞治疗股骨头坏死的可能机理。临床研究观察通络生骨胶囊配合外展承重运动塑形及牵引疗法治疗股骨头坏死的疗效,分析不同因素对治疗效果的影响,为进一步临床应用提供理论依据。 动物实验研究采用健康SD大鼠32只,雄性,体重200±20g。随机分为4组:A组(模型空白组);B组(木豆叶组);C组(单纯骨髓间充质干细胞组);D组(木豆叶联合骨髓间充质干细胞组)。每组8只,采用液氮冷冻法造模。C、D组注射骨髓间充质干细胞至股骨头内。造模后B、D组给予木豆叶,木豆叶按40mg/kg/d配制给药。治疗30天后麻醉处死大鼠,进行如下检测:采血,分离血清,测量血清钙磷含量;取完整股骨头脱钙处理后行组织病理结构观察、VEGF免疫组化染色并进行图像分析。 临床研究共收集2000年1月至2007年2月间广州中医药大学第一附属医院髋关节重点专科门诊股骨头坏死患者62例(85髋)进行临床观察,其中男32例(48髋),女30例(37髋),平均年龄48.9岁(20~73岁)。随访1~7年,平均2.4年。均给予通络生骨胶囊,每次4粒,每日3次;同时行外展承重,运动塑形及牵引疗法,每次30分钟,每天6次。服药同时辅助功能锻炼。治疗后对患者髋关节功能及X线表现进行疗效评定,并分析不同因素对治疗效果的影响。 动物实验结果:1.HE染色观察模型空白组骨小梁稀疏,变细,有断裂现象,结构紊乱,有碎片出现。骨小梁中骨细胞固缩、边聚或消失,空骨陷窝明显增多,髓腔内脂肪细胞体积增大,有的融合成泡状,骨小梁周沿可见梭形成骨细胞排列,但数量很少。木豆叶组和木豆叶联合BMSC组均见骨小梁排列整齐,规则,致密饱满,无碎裂。骨小梁上骨细胞核清晰可见,位于中央,少见空骨陷窝存在。髓腔内造血细胞丰富,无明显大的脂肪滴。骨小梁周沿梭形成骨细胞数量增多,排列致密。 2.血清磷含量木豆叶组、单纯BMSC组和木豆叶联合BMSC组较模型空白组增高,其中单纯BMSC组与模型空白组比较有显著性差异(p<0.05),木豆叶组和木豆叶联合BMSC组与模型空白组比较均有高度显著性差异(p<0.01),木豆叶组、单纯BMSC组与木豆叶联合BMSC组比较有显著性差异(p<0.05);血清钙含量木豆叶联合BMSC组增高,与模型空白组比较有显著性差异(p<0.05),其余各组比较无明显差异;免疫组化染色可见软骨细胞及血管内皮细胞着色,图像分析结果显示木豆叶组、单纯BMSC组和木豆叶联合BMSC组的阳性表达强度较模型空白组增强,与模型空白组比较均有高度显著性差异(p<0.01)。 临床疗效评价结果:优40.0%(34髋),良50.6%(43髋),可8.2%(7髋),差1.2%(1髋),总优良率90.6%;分期优良率:Ⅰ期100%(1髋),Ⅱ期100%(20髋),Ⅲ期92%(50髋),Ⅳ期71.4%(14髋)。影像学疗效评价结果:优87.0%(74髋),良11.8%(10髋),可1.2%(1髋),差0%(0髋),总优良率98.8%(84髋)。分期优良率:Ⅰ期100%(1髋),Ⅱ期100%(20髋),Ⅲ期98%(50髋),Ⅳ期100%(14髋)。 木豆叶联合骨髓间充质细胞可以提高血清中钙磷的含量水平,提高VEGF在软骨细胞及血管内皮细胞的阳性表达,提示其治疗股骨头坏死可能是通过增强细胞因子VEGF的表达,促进坏死局部血管增生,加速坏死的修复。通络生骨胶囊配合外展承重运动塑形及牵引疗法可以明显改善股骨头坏死患者髋关节功能,促进股骨头坏死的修复,防止或延缓股骨头坏死的塌陷,为其进一步临床应用提供了一定的理论依据。


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