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针灸对幼鼠CP模型炎性因子蛋白表达的影响

戚浩  
【摘要】: 研究目的 复制新生鼠缺氧缺血性脑损伤模型,观察不同组别脑瘫鼠行为学变化、脑组织病理形态改变及脑组织中炎性因子(TNF—αIL一6)蛋白表达的改变。 研究方法 一、实验材料及实验条件 动物:选用7d龄新生SD幼鼠,由广州中医药大学实验动物中心提供,SPF级,实验动物质量合格证明编号:0043108;许可证号:SCXK(粤)2008-0020。8窝90只,要求7日龄时体重12g,雌雄不限。鼠饲养环境:SPF动物实验室,温度22℃~26℃,相对湿度60%-80%,日光灯照射,定时通风换气,常规标准大鼠颗粒饲料喂养。实验动物设施使用证明,No.0023091;许可证号:0019777。 二、模型制备 在乙醚(醇)吸入麻醉下,分离左颈总动脉并结扎,缝合切口后放回鼠笼中2h,后置于37℃恒温水浴密闭容器中,以1L/min的速度通入8%氧气+92%氮气的混合气体,2.5h后取出,1h后作行为测定,翻身不能,平衡异常和左旋者视为成功模型,随机分为5组,并送回鼠笼中饲养。假手术组麻醉后分离左颈总动脉,但不结扎,术后亦不作低氧处理,行为测定无异常。 三、分组及治疗方法: (一)针刺组所有需要针刺治疗的小鼠针四肢及头部穴位。以直径2mm,长20mm的针灸针,先在“内关”、“涌泉”速刺微,不留针,然后针四肢及头部穴位。四肢穴位“曲池”、“足三里”穴针1分深左右,头部穴位“百会、颞Ⅰ针”平刺,进针后觉针下沉紧即可,留针10min。 (二)艾灸组无烟艾温和灸督脉10分钟。 (三)针刺+艾灸组针刺治疗后,行温和灸督脉10分钟。 (四)正常组、假手术组、模型组不予以任何治疗。 定位方法:穴位定位参照《实验针灸学》,结合人与动物骨度类比:顶骨正中定百会;外耳道口直上0.8cm处模拟颞Ⅰ针;桡骨近端的关节外侧,离腕关节约3mm左右的尺桡骨缝间取内关;足三里(即后三里),在膝关节后外侧,腓骨小头下约5mm处;后肢掌心前正中取涌泉穴;顶骨正中至尾骨为督脉。 (五)干预时间安排:治疗组组术后1、2d(出生后8、9d)休息,第一阶段术后3-8d(出生后10-15d)治疗6天,术后9d(出生后16d)休息,第二阶段术后10-15d(出生后17-22d)治疗6天,术后18d(出生后25d)处死取材。 四、采用苏木素—伊红(HE)染色法观察脑组织病理形态,反映缺氧缺血后脑组织的病理变化。 五、采用放射免疫法测定血清TNF-a、IL-6的水平。 研究结果 一、行为学 体重:正常组,假手术组,艾灸组,针刺+艾灸组这四组之间体重增加趋势没统计学差异,模型组与单纯针刺组之间也无统计学差异。而前四组与后两组相比,P=0.0000.01,体重增加的趋势有统计学意义,其体重增加的趋势更强。 悬吊实验、斜坡实验:不同处理方法对HIBD幼鼠肌力(悬吊试验),平衡能力(斜坡试验)增长的差异有统计意义。多重比较结果显示:不同组别间,肌力(悬吊试验),②假手术组①正常组⑥针刺+灸组⑤艾灸组③模型组④单纯针刺组;平衡能力(斜坡试验)①正常组②假手术组⑥针刺+灸组⑤艾灸组④单纯针刺组③模型组。因素time和处理方法的交互作用方面,肌力(悬吊试验)增长趋势:②假手术组①正常组⑥针刺+艾灸组⑤艾灸组③模型组④单纯针刺组;平衡能力(斜坡试验)增长趋势:①正常组②假手术组⑥针刺+灸组⑤艾灸组④单纯针刺组③模型组。 Y迷宫实验: Y迷宫:利用GLM下的Univariate随机区组设计方差分析结果显示:不同处理组间,F=2.4687,P=0.0000.01。可以认为不同处理组Y迷宫正确次数不完全相等。多重比较结果显示:①正常组②假手术组>⑥针刺+灸组⑤艾灸组④单纯针刺组③模型组。 二、病理形态学 普通光镜10×20倍下随机观察每张切片5个视野内脑缺血缺氧后病理变化情况。脑组织常规石蜡切片,HE染色后,神经细胞胞浆呈淡紫色,核呈蓝黑色。正常对照组及假手术组皮层鼠皮质厚薄均匀,神经细胞形态、结构无异常。模型组皮质变薄,部分神经细胞核固缩,局限性神经元数目减少,可见区域性筛网状结构,即软化灶,胶质细胞增生明显。针刺组、温和灸组及针刺结合温和灸治疗组仅见区域性小面积染色变浅,仍有不同程度的神经细胞变性,少量神经细胞核固缩。 三、炎性因子的蛋白表达 IL-6含量:模型组小鼠血清含量IL-6显著高于正常组、假手术组(P0.05),假手术组IL-6含量与正常组含量差异没有统计学意义(P0.05),针刺组、艾灸组、针灸结合组血清IL-6含量高于正常组,但没有统计学意义(P0.05)。 TNF-α含量:TNF-α模型组小鼠血清TNF-α含量显著高于正常组、假手术组(P0.05),假手术组TNF—α含量与正常组含量差异没有统计学意义(P0.05),针刺组、艾灸组、针灸结合组血清TNF—α含量高于正常组,但没有统计学意义(P0.05)。 结论 1.颈动脉结扎加低氧处理可以成功复制新生鼠缺氧缺血性脑损伤模型。 2.针灸可改善脑瘫幼鼠的平衡力、学习及记忆力,针刺、艾灸对CP幼鼠行为学的恢复都有促进作用,而两者结合后效果最佳。 3.针灸可改善脑瘫幼鼠神经细胞形态及增加海马组织正常神经细胞计数。 4.针灸对脑瘫鼠炎性因子的表达差生影响,对脑瘫后炎性因子含量升高有调整作用。


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