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染料荧光探针与蛋白质、核酸相互作用的研究

吴霖  
【摘要】: 本文提出以染料碱性品红和偶氮氯膦Ⅰ作为蛋白质的探针,碱性品红和铝试剂作为核酸探针。研究结果表明: 1 研究了以三苯甲烷类阳离子染料碱性品红(RL)与牛血清白蛋白(BSA)的结合模型,发现结合反应符合Pesavento提出的相分配模型,求得不同温度下RL与BSA相互作用的结合常数,依据热力学常数确定了RL与BSA之间的作用力类型为疏水作用力。以RL为荧光探针建立蛋白质的定量分析方法。在近中性范围内,碱性品红与蛋白质有较强的结合,该产物的荧光强度与蛋白质的量呈线性相关关系。线性响应范围为0.02~5.0μg/mL,最低检出限可达19.6μg/L,用于实际样品中蛋白质含量的测定,结果满意。 2 以三苯甲烷类阳离子染料碱性品红(RL)为荧光探针建立DNA的定量分析方法。在近中性范围内碱性品红与DNA有较强的结合,生成复合物的荧光强度与DNA的量成线性上升关系,线性响应范围为0.048~33.0μg/mL(r=0.9904),检测限38.9μg/L。并用于样品中DNA含量的测定,得到满意的结果,并对作用机理进行了探讨,认为RL与DNA相互作用存在插入结合形式。 3 在pH9.25 Britton-Robinson(B-R)缓冲介质中,用荧光光度法研究了酸性染料偶氮氯膦Ⅰ(CP Ⅰ)与蛋白质的相互作用,牛血清白蛋白(BSA)对CP Ⅰ的荧光有猝灭现象,使CP Ⅰ最大荧光峰从578nm红移至610nm,通过对荧光猝灭机理进行了探讨,认为两者之间的猝灭是由于生成不发荧光的复合物,属于静态猝灭过程,求得不同温度下的形成常数及热力学函数△H、△G、△S分别为-2.3KJ,-31.2KJ,98.6J,根据热力学函数确定了两者是通过静电作用力结合的。还对荧光猝灭的实验条件进行了优化,建立了蛋白质定量的线性方程△F=20.8C-6.8(μg/mL),线性响应范围0.04~30.0μg/mL、检出限0.031μg/mL(r=0.9956),并应用于实际及合成样品中BSA含量的分析。 4 探究铝试剂在不同pH值下的光谱特征时,发现pH为4.04的Britton-Robinson缓冲介质中,铝试剂能与DNA形成复合物,荧光光谱发生紫移,且荧光强度与DNA的量呈线性关系。确定了最佳反应条件,制定了四种核酸的工作曲线,其线性范围宽,灵敏度较高,并用于实际样品的测定。本方法中试剂及反应体系稳 摘要 定,分析手续简便经济。


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