木薯遗传转化体系的优化及1-sst基因转化木薯的研究

【摘要】：本研究对我国主要的几个优良木薯栽培品种的遗传转化体系进行了详细优化,对7个品种木薯SC6, SC7, SC8, SC124, NZ188, C3以及C4影响其再生效率的几个重要因素进行了详细优化,在此基础上进行了SC6和SC8品种木薯农杆菌介导的转化体系的优化。之后利用优化好的木薯遗传转化体系进行了蔗糖：蔗糖果糖基转移酶基因1-SST转化木薯的研究,并通过pcr、RT-pcr、southern等分子生物学方法检测到了阳性植株。主要研究结果如下： 1.对木薯再生体系中的几个重要影响因素进行了研究。结果表明：6-BA对抑制木薯的顶端优势有明显的效果,浓度越高抑制作用越强；2,4-D和picloram促进了木薯初级体胚的形成,两者效果相当,在初级体胚诱导过程中所有品种的产胚率都能达到100%,但是在初级体胚继代过程中SC7产胚率很低,其他品种初级体胚继代产胚率都达到90%以上；体胚成熟时间对木薯子叶器官发生影响很大,成熟两周左右的子叶器官发生率较高,诱导频率达到70%以上；基因型不同的木薯体细胞胚发生频率和成熟子叶胚器官发生频率差异较大,其中SC8最高,NZ188次之,SC7最低。培养基中加入5mg/L AgNO3有助于提高成熟子叶胚的器官发生能力。 2.对木薯农杆菌介导的转化体系进行了优化,结果表明,农杆菌侵染木薯最适侵染条件为：菌液浓度OD600=1.0,AS添加量150μM,侵染时间45min,共培养3d。筛选和再生过程中培养基中的选择抗生素应该梯度添加,从低到高再到低。以此保证转化成功的概率及植株再生过程不再受阻。 3.用所优化的遗传转化体系对SC6和SC8品种木薯进行了1-Sst基因的转化研究,分别得到pcr阳性转化植株71株,83株；分别得到RT-pcr阳性转化植株2株,5株；得到SC6品种Southern杂交阳性转化株系一个,SC8品种Southern杂交检测正在进行。以上检测结果证明了所优化体系的可行性。